161664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás "X-537 A" antibiotikum-származékok előállítására

161664 11 mertetjük anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk. 1. példa A Streptomyces-organizmust levegőztetett szubmerz tápoldatban rázatóüvegben tenyésztjük. A tartályban történő fermentációhoz a levegőztetett üvegből vett, 3 napos szubmerz tenyészetből álló 5—10%-os ínokulumot alkalmazunk. A táptalaj 2% szójafoablisztet, 2% barna cukrot és 0,5% dikáliumfoszfátot tartalmaz. A fermentációt 28 °C-on végezzük el, miközben 150—300 liter/perc/l©0—300 liter oldat levegőáramot fúvatunk át. A fermentációt 4—6 óra múlva abbahagyjuk. A fermentlevet szűrjük. Az antibiotikumot extrakcióval nyerjük ki. Az extrakciót a következőképpen végezhetjük el: 204 liter fermentlevet szűrünk. A nedves szűrőlepényt 100 liter butilacetátban szuszpendáljuk. Az elegyet 12 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd szűrjük. A vizes réteget elválasztjuk és elöntjük. A butilacetátos oldatot — mely 30 millió Bacillus E egységet tartalmaz — vákuumban 3 literre betöményítjük, 10%-os nátriumkarbonát-oldattal mossuk és vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Az oldatot ezután 300 ml-re bepároljuk, majd 350 ml petroléterrel (f. p. 50—60 °C) hígítjuk; ily módon 41 g szilárd anyagot (mely mintavétel után 25 millió Bacillus E egységet tartalmaz) izolálhatunk. A szilárd anyagot Soxhlet-készülékben 4 liter petroléterrel (f. p. 50—60 °C) 40 órán át extraháljuk. Az extraktot vákuumban szárazra pároljuk. A kristályos maradékot petroléterben felvesszük. A kapott oldatot szűrjük. 24,49 g anyagot kapunk, mely mg-onként 500 E egységet tartalmaz (összesen 12,25 millió % E egységet). Az anyalúgból további 5,73 g kristályos antibiotikum izolálható. Az antibiotikumot nátriumsója alakjában kapjuk. A nátriumsót éter-petroléter elegyből történő átkristályosítás után éterben oldjuk, híg kénsavval mossuk és ily módon a szabad sav alakjában levő antibiotikumot kapjuk. Az éter eltávolítása után kapott olajos maradékot etanolból kristályosítjuk. A kapott termék a tiszta 3-metil-6-[7-etil-4-hidroxi-3,5-dimetil-6-oxo-7-/5-etil-3-metil-5-(5-etil-5-hidroxi-6-metil-2--tetrahidropiranil)-2-tetrahidrofuril/-heptil]-szalicilsav (kristályos X—537A antibiotikum). Az olvadáspont többszöri etanolos átkristályosítás után nem változik, 100—109 °C marad (nem éles). 2. példa 10 g kristályos X—537A antibiotikum 100 ml p-dioxánnal képezett oldatát 200 ml 10%-os vizes nátriumhidroxid-oldattal elegyítjük. Az elegyet szobahőmérsékleten keverjük. A kapott kétfázisú elegyet 7 óra múlva azonos térfogatú éterrel extraháljuk. Az éteres extraktot nátriumszulfát felett szárítjuk és viszkózus olajjá betömé-12 nyitjuk, mely állás után kristályosodik. A kristályokat éter hozzáadása után szűréssel eltávolítjuk. Éteres átkristályosítás után színtelen tűk alakjában 3-metil-6-[7-etil-3,5-dimetil-6-oxo-5 -7-/5-etil-3-metil-5-(5-etil-5-hidroxi-6-metil-2--tetraihídropiraml)-2-tetrahidrofuril/-4-heptenil]-szalicilsav-nátriumsót (A-izomer) kapunk. O. p.: 220 °C [a]« _19,96° (1%, metanol). 10 3. példa A 2. példánál kapott éteres szűrletet szárazra pároljuk, a maradékot hexánban oldjuk és 200 g Florisillel töltött oszlopon krömatografáljuk. 15 Eluálószerként 2 liter hexán-éter elegytől (1:1) 2 liter éter-aceton (1:1) elegyig változó összetételű oldószereket, illetve oldószerelegyeket alkalmazunk. Az első eluált frakciót elöntjük. A második frakció keverékből áll, melyből állás után 20 etilacetátos kezeléssel további 3-metil-6-[7-etil-3,5-dimetil-6-oxo-7-/5-etil-3-metil-5-(5-etil-5--hidroxi-6-metil-2-tetrahidropiranil)-2-tetrahidrof uril/-4-heptenil] -szalicilsav-nátriumsó A-izomert kapunk. A szűrletet szilikagélen kroma-25 tografáljuk; eluálószerként metilénkloridtól acetonig változó összetételű oldószereket, illetve oldószerelegyeket alkalmazunk. Olaj alakjában a keverék másodi'k komponensét kapjuk, mely állás 3Q után kristályosodik. A kapott termék a 3-metil-6-[7-etil-3,5-dimetiP6-oxo-7-/5-etil-3-metil-5--(5-etil-5-hidroxi-6-metil-2-tetrahidropiranil)-2--tetrahidrofuril/-4-heptenil]-szalicilsav-nátriumsó B-izomer. O. p.: 125 °C; [a]g +27,64° 35 (1%, metanol). 4. példa 1,34 g kristályos X—537A antibiotikum 25 ml 40 szenkéneggel képezett oldatát 0,12 ml bróm és 10 ml szénkéneg oldatával cseppenként elegyítjük. A reakcióelegyet a szénkéneg eltávolítása céljából 12 órán át nitrogénatmoszférában állni hagyjuk. A maradékot etilacetátban oldjuk. Az 45 oldatot vizes nátriumhidrogénszulfit-oldattal, majd telített nátriumkarbonát-oldattal mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. Metilénklorid-hexán elegyből történő átkristályosítás után színtelen tűk alakjában 5,, 5-bróm-3-metil-6-[7-etil-3,5-dimetil-6-oxo-7-/5--etil-3-metil-5-(5-etil-5-hidroxi-6-metil-2--tetrahidropiranil)-2-tetrahidrofuril/-4-heptenil]-szalicilsav-nátriumsót kapunk. O. p. 235°; [a]^ +9,63° (1 %, dimetilszulfoxid). 55 5. példa 1,53 g X—537A antibiotikum-nátriumsót 30 ml szénkénegben 0,14 ml bróm és 10 ml szénkéneg 60 oldatával —5 °C-on 10 percen át cseppenként elegyítünk. Az oldószert nitrogénatmoszférában szobahőmérsékleten körülbelül 2 óra alatt eltávolítjuk. A maradékot a következőképpen tisztítjuk: az etilacetátos oldás után kapott oldatot 65 előbb vizes nátriumhidrogénszulfit-oldattal, majd