161594. lajstromszámú szabadalom • Reagens a lipáz-aktivítás meghatározására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS 161594 im\ Bejelentés napja: 1970. XII. 10. (BO-1264) Elsőbbsége: Német Szövetségi Köztársaság, 1969. XII. 10. (P 19 61 983.1.) Közzététel napja: 1972. V. 28. Megjelent: 1974. VII.3. Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/02 Bejelentés napja: 1970. XII. 10. (BO-1264) Elsőbbsége: Német Szövetségi Köztársaság, 1969. XII. 10. (P 19 61 983.1.) Közzététel napja: 1972. V. 28. Megjelent: 1974. VII.3. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Bejelentés napja: 1970. XII. 10. (BO-1264) Elsőbbsége: Német Szövetségi Köztársaság, 1969. XII. 10. (P 19 61 983.1.) Közzététel napja: 1972. V. 28. Megjelent: 1974. VII.3. (* r Feltalálóik): Dr. Hagen Alexander vegyész, Tutzing/Obb., dr. Michal Gerhard vegyész, Tutzing/Obb. Német Szövetségi Köztársaság. Tulajdonos: Boehringer Mannheim GmbH., Mannheim-Waldhof, Német Szövetségi Köztársaság. Reagens a lipáz-aktivitás meghatározására 1 A találmány a lipáz aktivitás meghatározására szolgáló reagensre és e reagens előállítási eljárására vonatkozik. A lipáz enzim a zsírokat zsírsavakra és diglieeridek rr bontja: CH2

0-CO-R

CHj0H CHO-CO-R * H2

0 hpáz CH-O-CORfRCOOH fH,o rn R CH,-o-coR ^ A diglieeridek tovább bomlanak monogliceridekké és végül glicerinné. Az orvosi- és gyógyszerkémiában, a biokémiában és az élelmiszerkémiában a lipázmeghatározásnak nagy jelentősége van. E célra ismert egy eljárás, amelynél a zsírokból felszabadított zsírsavakat titrálják. Ennek során először az olívaolajat gumiarabikum-oldattal emulgálják és az emulziót nátriumdezoxikolát-oldattal elegyítik. A kapott elegy pH-ját ismert töménységű nátriumhidroxiddal 9-es értékre állítják be. Egy lipázminta beadagolása után további nátriumhidroxidot adnak hozzá úgy, hogy a pH-t 9-es értéken tartsák. Az időegységben elhasznált NaOH-mennyiségből a lipáz-aktivitás kiszámítható. Az olivaolaj-kivonat annyiban előnyös, hogy specifikus; vizoldható glicerinészterek használatánál ugyanis nem lehet megkülönböztetni, hogy vajon a hidrolitikus hasadás a lipáz vagy az ész te rázok hatására jött- e létre. Lényeges hátránya az ismert eljárásnak abban van, hogy az olajemulzió nem marad sokáig állandó, ezért mindig frissen kell elkészíteni Az emulgálási fok ezenkívül az előállítási módtól függ és ezért változhat. Mivel a mért lipáz-aktivitás azonban az olajcseppeknek az emulzióban való eloszlási fokától függ, szabványosítás csak nagyon nehezen valósítható meg. A leírt hátrányokat a találmány szerint úgy küszöböljük ki, hogy egy előregyártóit száraz reagenst készítünk, amelyből vízzel való keveréssel egy kivonat-emulzió keletkezik, amely közvetlenül felhasználható a vizsgálathoz. A lipáz aktivitásának olívaolajnak, mint szubsztrátumnak alkalmazása melletti meghatározására szolgáló találmány szeg rinti reagenst az jellemzi, hogy olyan szilárdanyag-tartalommal rendelkezik, amely olívaolajat és 1 térfogatrész olívaolajra számítva legalább 0,3 súlyrész szerves védőkolloidot tartalmaz és ez a szilárd-anyag víz hozzáadása esetén emulziót alkot. ig Szerves védőkolloidként előnyösen dextránt, mannitot, szérumalbumint, gumiarabikumot és/vagy polivinüpirrolidont alkalmazunk. Jó eredményeket kapunk, ha a reagens olívaolajat és védőkolloidot körülbelül 1:1 súlyarányban tartalmazza a térfogatban. jg A találmány szerinti reagens poralakban, szemcsézett formában vagy tablettákká préselve fordul elő. A megadott határok betartása esetén a reagens azzal tűnik ki, hogy vízzel való keverésnél közvetlenül emulziót alkot, amelynek cseppecskenagyságát állandó körülmények betartásánál egyedül a 2Q reagens előállításához felhasznált olívaolaj-emulzió cseppecskenagysága határozza meg. A megadott olívaolaj és védőkolloid lényeges alkotórészeken kívül a találmány szerinti reagens célszerűen még emulgátort és/vagy aktivátort tartalmaz. Alkalmas emul-25 gátőrök példáiként például a taurokolátot és a nátriumdezoxikolátot emiitjük. Aktivátorként alkalmas például a nátriumklorid. A találmány szerinti reagens védőkolloidként különösen előnyösen tartalmaz gumiarabikumot kis mennyiségű szérumalbuminnal. 30 A találmány szerinti reagens egy különösen előnyös összetételben 1 térfogatrész olívaolajból, 0,7 - 1,2 súlyrész gumiarabikumból, 0,1 - 0,2 súly rész nátriumdezoxikolátból, 0,01 - 0,03 súlyrész szérumalbuminból és 0,01 - 0,03 36 súlyrész nátriumkloridból áll. 161594