161594. lajstromszámú szabadalom • Reagens a lipáz-aktivítás meghatározására

161594 Egészen meglepő, hogy olívaolajból és egy védőkolloidból a megadott arányok mellett olyan szilárdanyagot lehet előállítani, amely változás nélkül hosszú ideig raktározható és egyszerűen víz hozzáadásával mindenkor meghatározott cseppecskenagyságú emulzió készíthető belőle. A lipáz meghatározására alkalmas új reagens előállítására szolgáló találmány szerinti eljárás abban áll, hogy olívaolajat, védőkolloidot és adott esetben emulgátort és/vagy aktivátort vízben emuigálunk, illetve oldunk és a kapott emulziót liofilizáljuk. Liofilizálás előtt előnyösen a pH-t 8 és 10 közötti értékre állítjuk be. Az emulzió előállítása célszerűen ultrahang segítségével vagy mechanikus behatás utján megy végbe. Előnyösen 3/j-nál kisebb közepes cseppecskenagyságra emuigálunk. .A találmány szerinti reagens lehetővé teszi, hogy a lipáz-meghatározáshoz szükséges olajemulziót mindenkor a kívánt mennyiségben és az olajcseppecskék megkívánt eloszlási foka. szerint állítsuk elő anélkül, hogy az olajemulziót az olívaolaj körülményes emulgálása utján mindig frissen kelljen készítenünk. Azonkívül a reagens lehetővé teszi a meghatározás szabványosítását, ami a meghatározás pontosságát és reprodukálhatóságát lényegesen megjavítja. A lipáz- aktivitás meghatározásán kívül a találmány szerinti reagens zsírinfúziós-oldatok előállításához is felhasználható. A következő példa a találmány további szemléltetésére szolgál. Példa Az alábbi 1 ml olívaolaj (0,1 n NaOH-val semlegesítve; 3% tf/tf) 825 mg gumiarabikum (2,75% s/tf) 160 mg nátriumdezoxikolát (0,533% s/tf) 20 mg szérumalbumin (0,067% s/tf) 18,7 mg NaCl (0,062% s/tf) anyagokat vízzel 30 ml-re egészítjük ki. A gumiarabikum dezoxikolát, szérumalbumin és nátriumklorid feloldása után a keveréket ultrahang segítségével homogenizáljuk, mig a zsircseppecskék közepes átmérője körülbelül 2ju-t el nem éri (mérőmikroszkóp). A tejszerű emulziót alaposan lehűtjük és hűtőszáritással vízmentesítjük, mig egy fehér száraz készítmény nem keletkezik. A kapott reagensmennyiség elegendő egy meghatározás **_ G.Marchis-Mouren, L.Sarda és P. Desnuelle, Arch. Biochem. Biophys. 83^309 (1959) szerint makro-teszt esetén, illetve 150 meghatározásra mikro-tesztnél V.P. Dole, J. of clinical Investigation 35^150-154 (1956) szerint Lipáz- meghatározás kivitelezéséhez a találmány szerinti reagenshez 30 ml vizet adunk, rövid ideig összerázzuk, vagy mágneses keverővel összekeverjük és ezzel a reagens felhasználásra kész. A zsírcseppecskék az elkészített reagensben 90%-ban 3;u-os nagyságúak. Kísérletek azt mutatták, hogy gumiarabikum helyett más védőkolloidok, így különböző dextranfajtak (pl. T 70, T 20, T 250), mannit, szérumalbumin, polivinilpirrolidon is alkalmazhatók. 10 16 20 26 30 40 60 66 Emulgátor, szérumalbumin és aktivátor el is hagyhatók. A cseppecskék nagysága ebben az esetben azonban nem olyan finom az elkészítés után, mint az előbb leírt kiviteli alakban. Az előzőekben leírt eljárás egy változatánál az emulzió pH-ját a hűtőszárítás előtt valamely lúg, előnyösen nátriumhidroxid, adagolása utján 8 és 10 közötti, előnyösen 9-es értékre állítjuk be. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Reagens lipáz meghatározására olívaolajnak szubsxtrátként való alkalmazösával, azzal jellemezve, hogy . az olívaolajat és az 1 térfogatrész olívaolajra vonatkoztatva legalább 0,3 súlyszázalék szerves védőkolloidot víz hozzáadására emulziót képező szilárd anyag alakjában tartalmazza. 2. Az 1. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy védőkolloidként dextránt, mannitot, szérumalbumint, gumiarabikumot és/vagy polivinilpirrolidont tartalmaz. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy az olívaolajat és a védőkolloidot 1:1 súlyarányban tartalmazza. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy az adalékként emulgátort is tartalmaz. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy védőkoUoidként gumiarabikumot és kis mennyiségű szérumalbumint tartalmaz. 6. Az 1 -5. igénypontok bármelyike szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy adalékként aktivátort is tartalmaz. 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy az 1 térfogatrész olívaolajból, 0,7 - 1,2 súlyrész gumiarabikumból, 0,1-0,2 súlyrész nátriumdezoxikolátból, 0,01 - 0,03 súlyrész szérumalbuminból és 0,01 0,03 súlyrész nátriumkloridból áll. 8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy por- vagy tabletta-alakban van elkészítve. 9. Eljárás az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti reagens előállítására, azzal jellemezve, hogy olívaolajat, védőkolloidot és adott esetben emulgeátort és/vagy aktivátort tartalmazó emulziót liofilizáluuk. 10. A 9. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az emulzió pH-ját liofilizálás előtt 8 és 10 közötti értékre állítjuk be. 11. A 9. vagy 10. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az emulgálást ultrahang segítségével vagy mechanikus úton végezzük. 12. A 9-11. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 3 /u-nál kisebb közepes cseppecskenagyságra emuigárunk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 730264, OTH, Budapest