161542. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B-5050 antibiotikum-komplex és a komplex egyes komponenseinek előállítására
161542 17 kezelés után végrehajtott boncolás nem mutatott ki sem szervi, sem helyi elváltozásokat. A Staphylococcus törzsek piogén, ill. gennyképző baktériumok, amelyek gócos károsodásokat, pl. tályogokat képeznek. A tályogok gyakran a bőrön jelennek meg. A szokásos sebfertőzések közül a Staphylococcus törzsek okozzák a furunkulusokat és karbunkulusokat. A találmány szerint előállítható új antibiotikumok elsősorban az ilyen típusú fertőzések helyi kezelésére használhatók fel emlősökön, így kutyákon, macskákon, emberen. A Staphylococcus aureus által kiváltott fertőzés helyi kezelésére pl. az alábbi összetételű készítményt használhatjuk fel; 1 g lanolinhoz 20 mg B—5050—A antibiotikumot, 20 mg B—5050—B antibiotikumot, 20 mg B—5050—C antibiotikumot, 50 mg B—5050—D antibiotikumot, 50 mg B—5050—E antibiotikumot, 50 mg B—5050—F antibiotikumot, 20 mg kristályos B—5050 antibiotikum-elegyet (az 1. példában előállított termék), vagy 20 mg, a 2. példában előállított II. kristályelegyet adunk, és az elegyet fehér vazelinnal 10 g-ra egészítjük ki. Az alkotórészeket gondosan elegyítjük. Az így előállított krémmel befedjük a kezelendő sebet, és a krémet enyhén bedörzsöljük a kezelendő felületbe. A kezelést naponta legalább egyszer, de szükség esetén többször végezzük. A találmány szerint előállítható új antibiotikumokat bakteriosztatikus hatásuk következtében a gram-pozitív baktériumok hatásának kitett kórházi feszerelések és hasonló tárgyak fertőtlenítésére is felhasználhatjuk. A fertőtlenítendő felületre a hatóanyagot tartalmazó oldatot (pl. metanolos vagy etanolos oldatot) permetezzük. A fertőtlenítő oldatok hatóanyagként 20 mcg/ml B—5050—A antibiotikumot, 20 mcg/ml B—5050—B antibiotikumot, 20 mcg/ml B—5050 —C antibiotikumot, 50 mcg/ml B—5050—D antibiotikumot, 50 mcg/ml B—5050—E antibiotikumot, 50 mcg/ml B—5050—F antibiotikumot, 20 mcg/ml kristályos B—5050 antibiotikum-elegyet (az 1. példában előállított termék), vagy 20 mcg/ml, a 2. példában előállított II. kristályelegyet tartalmazhatnak. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 1. példa 2000 ml-es Sakaguchi-lombikokba 100—100 ml, 7,0 pH-értékű, 2,0% glükózt, 3,0% oldható keményítőt, 1,0% szójabablisztet, 1,0% kukoricalekvárt, 0,5% polipeptont (a Daigo Nutritive Chemicals Ltd. cég, Osaka, Japán által előállított kazein hidrolizátum), 0,3% nátriumkloridot, 0,3% kalciumkarbonátot és vizet tartalmazó előtenyészet-táptalajt töltünk, és a táptalajt sterilizáljuk. A steril táptalajt Streptomyces hygroscopicus IFO—12995 ferde agar tenyészetével beoltjuk (a törzset legalább 4 napig tenyésztettük), majd 28 °C-on, 115 fordulat/perc forgássebességű, 10 cm lökethosszú rázógépen 48 órán át tenyésztjük. 1000 ml így kapott tenyészetet hasz-18 nálunk fel a továbbiakban előtenyészetként. Az előtenyészetet 200 literes rozsdamentes fermentorban levő, 100 1, 7,0 pH-értékű, 3% glükózt, 5 0,5% kukoricalekvárt, 1,0% zsírtalanított szójabablisztet, 0,5% nátriumkloridot, 0,05% magnéziumszulfátot, 0,3% kalciumkarbonátot és vizet tartalmazó táptalajhoz adjuk, és az elegyet sterilizáljuk. Az inkubálást 24 órán át 28 °C-on vé-10 gezzük, ezalatt az elegyet 200 fordulat/perc sebességgel keverjük és 100 liter/perc sebességgel levegőztetjük. 100 liter így kapott tenyészetet 1000 liter sterilizált, az előzővel azonos összetételű táptalaj-15 hoz adunk, és az elegyet 2000 literes rozsdamentes fermentorba töltjük. Az inkubálást 28 °C-on 66 órán át végezzük, eközben az elegyet 1000 liter/perc sebességgel levegőztetjük és 120 fordulat/perc sebességgel keverjük. Az inkubáció ,0 alatt äz elegyhez az összmennyiségre számított kb. 0,05% Actocol habzásgátlót adunk (a Takeda Chemical Industries Ltd., Osaka, Japán cég terméke, 56-os OH-számú polioxipropilén-elegy). Az így kapott tenyészet Bacillus subtílis mikroorganizmus segítségével meghatározott, hígítási egységekben kifejezett antimikrobás erőssége 350 egység. A tenyészetet szűrjük. A 950 liter szűrt tenyészet pH-értékét 2 n vizes nátriumhidroxid-oldat,0 tal 8,5-re állítjuk, és 300 üter etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos oldatot elkülönítjük, vízzel mossuk, és 2x70 liter 0,005 n sósavoldattal extraháljuk. A vizes savas oldatokat egyesítjük, híg vizes ammóniumhidroxid-oldattal pH = 8,5 értékre lúgosítjuk, és 2x45 liter etilacetáttal ext-35 raháljuk. Az etilacetátos oldatot vízzel mossuk, szárítjuk és vákuumban 50 ml végtérfogatra bepároljuk. A maradékhoz 750 ml n-hexánt adunk. 95 g nyers, por alakú B—5050 antibiotikum-elegyet kapunk. A por alakú terméket melegítés közben 450 ml benzolban oldjuk. A meleg oldathoz 2 g aktív szenet adwnk, az elegyet szűrjük, és a szűrletet lehűtjük. 19,0 g színtelen, tűkristályos B—-505Q* antibiötikurn-elegy válik ki. 45 10 g kristályos B—5050 antibiotikurrl-elégyet 50 ml etilacetátban oldunk, és az oldatot, 450 g szOikagélen (szemcseméret: 0,05--—-0,2 rom á Merck A. G., Darmstadt, NSZK cég Wméke) oszlopkromatográfiának vetjük alá, A felvitt anyagot kifejlesztjük, majd 2:1 térfogatarányú etilacetát :benzol eleggyel eluáljuk. Az első 600 mil eluátum antimikrobás aktivitást mutat. Az eluátumot bepároljuk, és a száraz maradékot forró benzolban oldjuk. Az oldatot állni hagyjuk 1 g színtelen, tűkristályos, főtömegében B—5050— —A antibiotikumból álló terméket kapunk. Az előző lépésben az oszlopot 4 liter etilacetát-kenzol eleggyel eluáltuk. Az eluálást most 3 li«0 ter fitilacetáttal folytatjuk, az eluátumot felfogjuk, vákuumban bepároljuk, és a kapott maradékot forró benzolban oldjuk. Az oldatból állás közben 550 mg színtelen, kristályos, főtömegé«s Í!f 1 1 ?-5050 -F antibiotikumból álló termék vá»5 lik lu.
