161542. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B-5050 antibiotikum-komplex és a komplex egyes komponenseinek előállítására

21 161542 22 az utolsó frakció B—5050—E és B—5050—F antibiotikumot tartalmaz. 2 g, B—5050—B és B—5050—C antibiotikumot tartalmazó frakcióból nyert kristályelegyet 15 ml «tilacetátban oldunk, és az oldathoz 10 ml benzolt adunk. Az oldatot 250 g szilikagélt tartalmazó oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként 3:2 térfogatarányú etilacetát :benzol elegyet alkalmazunk. Az eluátumot 20 ml-es frakciókba gyűjtjük. Az azonos komponenseket tartalmazó frakciókat egyesítjük, bepároijuk, és a maradékot benzolból, vagy etilacetát és n-hexán elegyéből átkristályosítjuk. 940 mg kristályos B—5050— —-C antibiotikumot, 75 mg kristályos B—5050—D antibiotikumot és 83 mg kristályos B—5050—B antibiotikumot kapunk. 1,2 g, a B—5050—D és B—5050—E antibiotikumot tartalmazó frakcióból elkülönített kristályelegyet a fenti körülmények között szilikagél oszlopon kromatografálunk. 600 mg kristályos B—5050—E antibiotikumot kapunk. A B—5050— —B és B—5050—C antibiotikumot tartalmazó frakciót követő frakció főkomponensként B— —5050—C antibiotikumot tartalmaz. Az említett frakcióból elkülönített 770 mg nyers kristályos terméket 5 ml acetonban oldjuk, és az oldatot a fent ismertetett körülmények között 100 g szilikagélt tartalmazó oszlopon kromatografáljuk. 220 mg kristályos B—5050—C antibiotikumot kapunk. 3. példa 4000 liter, a 2. példában ismertetett főfermentálás után kapott szűrt fermentlé pH-ját 8,0 értékre állítjuk, és az elegyet 0,3 térfogatrész etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos oldatot kb. 100 liter végtérfogatra bepároljuk. A tömény oldatot 50 ml vízzel mossuk, majd 3x50 ml, foszforsawal pH = 4 értékre savanyított 1/3 n vizes káliumdihidrogénfoszfát-oldattal extraháljuk. A vizes extraktumokat egyesítjük, 8 n vizes ammóniumhidroxid-oldattal pH = 9—10 értékre lúgosítjuk és 75 liter etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos oldatot 3x25 liter vízzel mossuk, majd kb. 1,5 liter végtérfogatra bepároljuk, és a tömény oldathoz kb. 30 liter n-hexánt adunk. 522 g nyers, porszerű terméket kapunk. Benzolos átkristályosítás után 272 g kristályos B—5050 antibiotikum-elegyet kapunk. Azonos eredményt érünk el, ha a fenti eljárásban káliumhidrogénkarbonát-oldat helyett 0,2 n vizes ecetsavoldatot alkalmazunk. 19 g fenti módon előállított B—5050 antibiotikum-elegyet 75 ml acetonban oldunk, és az oldatot 800 g szilikagélt tartalmazó oszlopon (a fenti minőségű termék, gyártó: Merck A. G.) kromatografáljuk. Eluálószerként 3000 ml 1:1 térfogatarányú etilacetát :benzol elegyet alkalmazunk. 7,25 g, főtömegében B—5050—A és B—5050—B antibiotikumból álló kristályos terméket kapunk. Az eluálást ezután 2:1 térfogatarányú etilacetát :benzol eleggyel folytatjuk. Az első, 1100 mles frakciót a fent leírt módon dolgozzuk fel. 2,22 g, főtömegében B—5050—B és B—5050—C antibiotikumból álló kristályos terméket kapunk. A következő 200 ml-es frakcióból 0,90 g, főtömegében B—5050—C antibiotikumból álló kristályos terméket különítünk el. 5 Az ezt követő 300 ml-es frakcióból 1,4 g, főtömegében B—5050—C és B—5050—D antibiotikumot tartalmazó kristályelegyet kapunk. Az utolsó 600 ml-es frakcióból 1,99 g, főtömegében B—5050—D és B—5050—E antibiotikumból álló 10 kristályelegyet különítünk el. Az eluálást ezután 600 ml 3:1 térfogatarányú etilacetát: benzol eleggyel folytatjuk. Az eluátumból 0.645 g, főtömegében B—5050—D és B—5050—E antibiotikumot tartalmazó kristályelegyet kapunk. Az oszlopot végül 1600 ml etilacetáttal eluáljuk. 15 2,09 g kristályos, lényegében tiszta B—5050—F antibiotikumból álló terméket kapunk. A fenti eljárás során kapott 7,25 g, B—5050—A és B—5050—B antibiotikumot tartalmazó kris-20 tályelegyet 40 ml acetonban oldjuk, és az oldatot 400 g szilikagélt tartalmazó oszlopon kromatografáljuk. Eluálószerként 1:1 térfogatarányú etilacetát :benzol elegyet alkalmazunk. 1,5 g kristályos B—5050—A antibiotikumot és 0,65 g kristá-25 lyos B—5050—B antibiotikumot kapunk. A fenti eljárás során kapott 2,22 g súlyú, B—5050—B és B—5050—C antibiotikumot tartalmazó kristályelegyet 20 ml acetonban oldjuk, és az oldatot 300 g szilikagélt tartalmazó oszlo-38 pon kromatografáljuk. Az oszlopot 3:1 térfogatarányú benzol:aceton eleggyel eluáljuk. 0,398 g kristályos B—5050—B antibiotikumot adunk. Az eluálást ezután 2:1 térfogatarányú benzol :aceton eleggyel folytatjuk. 0,269 g kristályos B—5050—C 35 antibiotikumot kapunk. A lényegében tiszta B—5050—C antibiotikumból álló 0,90 g kristályos terméket 5 ml acetonban oldjuk, és az oldatot 100 g szilikagélen kromatografáljuk. Eluálószerként 2:1 térfogatará-40 nyú etilacetát :benzol elegyet alkalmazunk. 0,258 g kristályos B—5050—C antibiotikumot kapunk. Az 1,40 g, B—5050—C és B—5050—D antibiotikumot tartalmazó kristályelegyet 10 ml acetonban oldjuk, és 150 g szilikagélt tartalmazó 45 oszlopon kromatografáljuk. Eluálószerként 2:1 térfogatarányú benzol:aceton elegyet használunk. 0,596 g B—5050—C antibiotikumot, és 0,187 g kristályos B—5050—D antibiotikumot kapunk. 50 Az 1,99 g súlyú, B—5050—D és B—5050—E antibiotikumot tartalmazó kristályelegyet 30 ml acetonban oldjuk, és az oldatot 300 g szilikagélt tartalmazó oszlopon kromatografáljuk. Eluálószerként 2:1 térfogatarányú benzol :aceton ele-55 gyet alkalmazunk. 0,304 g kristályos B—5050—D antibiotikumot és 0,187 g kristályos B—5050—E antibiotikumot kapunk. A lényegében tiszta B—5050—F antibiotikumot tartalmazó, 2,09 g kristályos terméket 15 ml acetonban oldjuk, és 60 az oldatot 250 g szilikagélt tartalmazó oszlopon kromatografáljuk. Eluálószerként 3:1 térfogatarányú etilacetát :benzol elegyet alkalmazunk. 0,585 g kristályos B—5050—F antibiotikumot ka«5 punk.