161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
15 Számított: C: 62,96%, H: 7,23%, N: 7,73%. Talált: C: 62,90%, H: 7,30%, N: 7,75%. 6. lépés: H-lle-Pro-OH előállítása 130 ml metanolban a szokásos módon hidrogenolizálunk 6,5 g (18 mmól) védett dipeptidet (5. lépés). A hidrogénezés befejeztével a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, s az anyagot 100 ml acetonból kristályosítjuk. Szűrés, acetonos mosás és szárítás után 3,75 g (91,5%) anyagot kapunk. Op.: 133—135°, R2 0,10—0,22. [a]3 2 6 ° 5 —218,5° (c=l, metanolban). Analízisa: C^^QN^O^ • H2 0 (M: 237,30) képlet alapján: Számított: C: 55,46%, H: 8,92%, N: 11,80%, O: 23,59%. Talált: C: 55,47%, H: 8,96%, N: 11,73%, O: 23,17%. 7. lépés: Z-Tyr-Ile-Pro-OH előállítása Vízmentes piridinben (25 ml) szuszpendálunk 5,45 g (23,9 mmól) szabad dipeptidet (6. lépés). Hozzáadunk 10,3 g (23,6 mmól) karbobenzoxi-tirozin-p-nitrofenilésztert és 3,34 ml (23,9 mmól) trietilamint, majd a reakcióelegyet három órán át szobahőmérsékleten kevertetjük és éjszakán át állni hagyjuk. Az oldószer elpárologtatása után (csökkentett nyomáson) a párlási maradékot 100 ml vízben oldjuk, széndioxiddal telítjük és 3 x 50 ml éterrel mossuk. Az éteres mosókat egyesítjük, 5 x 10 ml 5%-os nátriumbikarbonát oldattal kirázzuk. A vizes fázisokat egyesítjük, 5 N sósavval savasítjuk és az anyagot etilacetáttal extraháljuk (3 x 60 ml). Az etilacetátos fázisokat vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot 50 ml 5%-os nátrium-hidrogénkarbonát oldatban oldjuk, hidegen 5 N sósavval savasítjuk és a kivált szilárd anyagot szűrjük, vízzel mossuk, szárítjuk. 11,2 g anyaghoz jutunk (90,0%). Op.: 105—110° R^ 0,50—0,60. [a}2 ° —56,6° (c=l, metanolban). Analízisa: C2 gH3 5 0 7 N 3 (M: 525,58) képlet alapján: Számított: C: 63,98%, H: 6,17%, O: 21,31%, N: 7,99%. Talált: C: 63,53%, H: 6,80%, O: 21,60%, N: 7,89%. 8. lépés: Z-Tyr-Ile-Pro-OPCP előállítása Feloldunk 10 ml vízmentes tetrahidrofuránban 2,6 g (5 mmól) védett tripeptidet (7. lépés), hozzáadunk 0,7 ml (5 mmól) trietilamint, 0,53 g (2 mmól) pentaklórfenolt és 2,5 g (6 mmól) triklórecetsav-pentaklórfenilésztert. A reakcióelegyet egy órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtatjuk. A párlási maradékot 50 ml etil-16 acetátban oldjuk és kirázzuk 3 x 15 ml vízzel, 15 ml N sósavval, 3 x 15 ml vízzel, 5 x 15 ml 5%-os káliumhidrogénkárbonát oldattal, s végül vízzel. Az így kapott etilacetátos oldatot 5 vízmentes magnéziumszulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A párlási maradékot diizopropiléterrel eldörzsöljük, szűrjük, diizopropiléterrel mossuk és szárítjuk. 3,1 g (80%) amorf sárga port kapunk. Op.: 106° 10 (bomlik), R* 1,0, R^ 0,20—0,30. 9. lépés: Z-Tyr-Ile-Pro-Lys(BOC)-Glu(OtBu)Gln-Lys(BOC)-OMe előállítása 15 4,7 g (5 mmól) védett tetrapeptid-metilésztert (4. lépés) katalitikusan hidrogénezünk 100 ml metanolban (Rj! 0,0). A reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet vákuumban 20 szárazra pároljuk. A párlási maradékot 10 ml vízmentes piridinben oldjuk, hozzáadunk 3,9 g (5 mmól) védett tripeptid-aktivésztert (8. lépés), 0,7 ml (5 mmól) trietilamint, és a reakcióelegyet egy napig szobahőmérsékleten állni hagy-25 juk. Az oldószert redukált nyomáson elpárologtatjuk, a párlási maradékot feloldjuk 80 ml etilacetátban és kirázzuk vízzel, N citromsavoldattal, vízzel, 5%-os nátrium-bikarbonát oldattal, vízzel (3 x 20 ml), az etilacetátos olda-30 tot vízmentes magnéziumszulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A párlási maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, szárítjuk. 5,7 g nyerstermékhez jutunk, melyet további tisztítás céljából 100 ml vízmentes 35 etilacetátból átoldunk. A kapott fehér amorf anyag súlya 5,2 g (80%). Op.: 158—162°. Bj 0,50—0,60, R^ 0,25—0,35. [a]20 —49,9° (c=l, metanolban). 40 Analízisa: CB5 H 100 O 18 N 10 (M: 1309,53) képlet alapján: Számított: C:59,61%, H: 7,69%, O: 21,99%, N: 10,70%. 45 Talált: C: 59,96%, H: 7,58%, O: 22,15%, N: 10,84%. 20. lépés: Z-Tyr-Ile-Pro-Lys(BOC)-Glu(OtBu)-50 -Gln-Lys(BOC)-N 2 H 3 előállítása Feloldunk 10 ml meleg metanolban 4,7 g (3,6 mmól) védett heptapeptid-metilésztert (9. lépés), hozzáadunk 0,77 ml (11,0 mmól) 72%-os 5g hidrazin-hidrátot és szobahőmérsékleten hét napon át állni hagyjuk. A reakcióelegyet 50 ml éterrel meghígítjuk, a kivált kristályokat szűrjük, éterrel mossuk. Az anyagot szűrőn 50 ml 2%-os vizes ecetsavval eldörzsöljük, vízzel ala-60 posan kimossuk és szárítjuk. 4,25 g (90%) fehér kristályos anyagot kapunk. Op.: 170—171° Rt 0,10—0,20. [a]20 —47,15° (c=l, metanolban). Analízisa; C64 H 100 O 17 N 12 (M: 1309,54) képlet 65 alapján: 8
