161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
161479 13 14 átkristályosítjuk. Szárítás után 4,8 g (92%) fehér kristályos anyaghoz jutunk. Op.: 173—175°, R4 0,68—0,80, R5 f 0,40—0,52. [a) 2 , 0 —11,52° (c=l, metanolban). Analízisa: C25 H 38 0 8 N 4 (M: 522,59) képlet alapján: kristályos anyaghoz jutunk. Op.: 170—173°, R* 0,68—0,80, R* 0,40—0,52. [a]20 —23,4° (c=l, metanolban). 5 Analízisa: C^rL^NgO^ (M: 707,80) képlet alapján: Számított: C: 57,69%, H: 7,55%, N: 9,89%, Talált: C: 57,35%, H: 7,64%, N: 9,34%. Számított: C: 57,45%, H: 7,33%, N: 10,72%, O: 24,49%. 10 Talált: C: 57,32%, H: 7,35%, N: 10,70%, 4. lépés: Z-Lys(BOC)-Glu(OtBu)-Gln-Lys(BOC)O: 24,36%. -OMe előállítása 2. lépés: H-Gln-Lys(BOC)-OMe-(COOH)2 előállítása Feloldunk 180 ml metanolban 8,75 g (16,7 mmól) védett dipeptídet (1. lépés), hozzáadunk 1,5 g (16,7 mmól) vízmentes oxálsavat és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk és a párlási maradékot 50 ml acetonból kristályosítjuk. Szűrés és szárítás után 7,35 g nyersterméket kapunk, melyet 15 ml metanol, 100 ml éter elegyéből átkristályosítva 6,85 g (86%) fehér kris tályos anyaghoz jutunk. Op.: 125—127' 0,37—0,48. R2 Analízisa: C19 H 34 N 4 O 10 (M: 478,49) képlet alapján: Számított: C: 47,69%, H: 7,16%, N: 11,71%. Talált: C: 47,12%, H: 7,19%, N: 11,73%. 3. lépés: Z-Glu(OtBu)-Gln-Lys(BOC)-OMe előállítása Feloldunk 15 ml N-kénsav és 15 ml éter elegyében 5,7 g (11 mmól) karbobenzoxi-glutaminsav-^-terc.-butilészter-diciklohexilammónium sót, a vizes fázist még kétszer éterrel kirázzuk, az egyesített, éteres fázisokat háromszor vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A párlási maradékot 20 ml vízmentes tetrahidrofuránban oldjuk, hozzáadunk 1,22 ml (11 mmól) N-metil-morfolint és hűtés, keverés közben —10° alatti hőmérsékleten 1,45 ml (11 mmól) klórszénsav-izobutilésztert. A reakcióelegyet 10 percen át keverjük, majd hozzáadunk 4,8 g (10 mmól) szabad dipeptid só (2. lépés) és 2,8 ml trietilamin 10 ml dimetilformamidos oldatát (3 x 1 ml dimetilfomamiddal beöblítjük). Fél órán át hidegen, két órán át szobahőmérsékleten keverjük és éjszakán át állni hagyjuk. Az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtatjuk, a párlási maradékot N citromsavoldattal eldörzsöljük, szűrjük, vízzel, 5%-os kálíumhidrogénkarbonát oldattal és vízzel mossuk, szárítjuk. A kapott nyersterméket (6,65 g) 70 ml etilacetáttal kifőzzük, hidegen szűrjük, éterrel mossuk, 30 ml metanol és 30 ml víz elegyéből átkristályosítjuk és szárítjuk. 6,5 g (91%) fehér 100 ml metanolban a szokásos módon hidro!5 génezünk 9,7 g (13,7 mmól) védett tripeptidet (3. lépés) (R2 0,45). A hidrogénezés befejeztével a katalizátort szűrjük, a szűrletet szárazra pároljuk. Feloldunk 22 ml tetrahidrofuránban 5,5 g (14,4 mmól) karbobenzoxi-e-terc.-butiloxikarbonil-lizint, hozzáadunk 1,6 ml (14,4 mmól) N-metil-morfolint . és —20°-on 1,9 ml (14,4 mmól) klórszénsav-izobutilésztert. Tíz percig —10°-on keverjük, majd hozzáadjuk a fenti amino-komponens 10 ml dimetilformamidos oldatát (3x3 ml-rel bemossuk). A reakcióelegyet egy órán át hidegen keverjük és éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, a párlási maradékot N citromsavoldattal eldörzsöljük, szűrjük, vízzel, 5%-os nátrium-hidrogénkarbonát oldattal, vízzel mossuk és 100 ml metanol és 100 ml víz elegyéből átkristályosítjuk. Szárítás után 11,45 g (89%) anyagot kapunk. Op.: 162—164°, R* 0,68—0,80, R^ 0,40—0,52. [a]2 , 0 —27,1° (c=l, metanolban). 20 25 30 35 Analízisa: C45 H 73 0 14 N 7 (M: 936,09) képlet alapján: 40 Számított: C O Talált: C O 57,73%, H: 7,86%, N: 10,48%, 23,93%. 57,00%, H: 7,92%, N: 10,73%, 23,94%. 45 5. lépés: Z-Ile-Pro-OH előállítása 55 ml dimetilformamidban szuszpendálunk 6,5 g (56,5 mmól) prolint, hozzáadunk 23,0 g (51,5 mmól) karbobenzoxi-izoleucin-2,4,5-tri-50 klórfenilésztert és 7,9 ml (56,5 mmól) trietilamint, majd szobahőmérsékleten két órán át keverjük és két napig állni hagyjuk. Az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtatjuk, a párlási maradékot 300 ml etilacetátban oldjuk, 55 3 x 100 ml N sósavval és háromszor vízzel kirázzuk. Az organikus fázist magnéziumszulfáton megszárítjuk, csökkentett nyomáson bepároljuk. Az anyagot 50 ml etilacetát, 200 ml petroléter elegyéből kristályosítjuk. Szűrés és szá-60 rítás után 14,8 g (79%) anyagot kapunk. Op.: 128—131°, R* 0,50—0,60. [a]2 , 0 —79,2° (c=l, metanolban). Analízisa: C19 H 26 0 5 N 2 (M: 362,41) képlet alap-65 ján: 7
