161479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glutaminsav és/vagy aszparaginsav- komponenseket tartalmazó polipeptidek szintézisére
11 Analízisa: C63 H 95 0 18 N 1:l (M: 1294,478) képlet alapján: Számított: C: 58,45%, H: 7,39%, O: 22,25%, N: 11,90%. Talált: C: 58,49%, H: 7,34%, O: 22,44%, N: 11,97%. 14. lépés: H-Phe-Leu-Gln-Asp(OtBu)-Pro-Glu-(OtBu)-Thr-Ser~Leu-NH2 előállítása 62,02 g (47,9 mmól) védett nonapeptidamidot (13. lépés) 1300 ml metanolban szuszpendálva csontszenes palládium jelenlétében hidrálunk. A reakció végére az anyag feloldódik. Ezután a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk. A maradékot kevés etanolban oldjuk és benzol hozzáadása után ismét bepároljuk, majd éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel mossuk. 55,6 g (kb. 100%) anyagot kapunk. Op.: 142—6°. Rj. 0,53— 0,61, R3 0,07—0,12. Analízisa: Cr)5 H g9 O if) N J t (M: 1160,35) képlet alapján: Számított: C: 56,81%, H: 7,74%, N: 13,28%. Talált: C: 56,39%, H: 7,74%, N: 13,56%. 15. lépés: Z-Ser-Phe-Leu-Gln-Asp(OtBu)-Pro-Glu(OtBu)-Thr-Ser-Leu-NH2 előállítása 55,45 g (46,9 mmól) szabad nonapeptidamidot enyhe melegítés közben feloldunk 280 ml dimetilformamidban, majd 0°-ra hűtjük és 27,5 g (56,3 mmól) karbobenzoxi-szerinpentaklórfenilésztert adunk hozzá. A reakcióelegyhez két óra alatt három részletben 7,9 ml (56,3 mmól) trietilamint adunk és állni hagyjuk éjszakán át. Másnap a dimetilformamidot ledesztilláljuk és a maradékot eldörzsöljük éterrel, szűrjük, mossuk éterrel, 1 N citromsavoldattal, vízzel, 5%-os nátrium-bikarbonátoldattal, vízzel, s végül éterrel. Szárítás után 60 g anyagot kapunk, melyet 1000 ml metanolban forrón feloldunk és 1000 ml meleg vizet adunk hozzá. Előbb szobahőmérsékletre hűtjük, majd jégszekrényben hagyjuk állni éjszakán át. A kivált anyagot szűrjük, 10%-os vizes metanollal mossuk és szárítjuk. 53,8 g (83%) anyagot kapunk. Op.: 199° (bomlik), Rj. 0,38—0,47. Analízisa: C6e H i00 O 20 N 12 (M: 1381,556) képlet alapján: Számított: C: 57,35%, H: 7,37%, N: 12,14%. Talált: C: 57,20%, H: 7,45%, N: 12,05%. 16. lépés: Z-Tyr-Ser-Phe-Leu-Gln-Asp(OtBu)-Pro-Glu(OtBu)-Thr-Ser-Leu-NH2 előállítása 8,52 g (6,75 mmól) védett dekapeptidamidot 200 ml metanolos oldatban hidrogénezünk csontszenes palládium mellett. A reakció végén {R2 f 0,33—0,39) a katalizátort kiszűrjük, az oldatot betöményítjük, majd benzol hozzáadása után 12 szárazra pároljuk. A maradékot feloldjuk 40 ml dimetilformamidban és 4,56 g (8 1 mmól) karbobenzoxi-tirozinpentaklórfenilésztert és 1,13 ml (8,1 mmól) trietilamint adunk hozzá 0°-on. 5 A reakcióelegyet éjszakán át állni hagyjuk, majd bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. Szűrés után az anyagot mossuk éterrel, 1 N citromsavoldattal, vízzel, 5%-os nátriumbikarbonátoldattal, vízzel, s végül éterrel. Szá-10 rítás után 8,5 g (81,5%) anyagot kapunk. Op.: 192—193°, Rj. 0,38—0,48. Analízisa: C 75H 109 O 22 N,| 3 (M: 1544,726) képlet alapján: 15 Számított: C: 58,10%, H: 7,11%, N: 11,78%. Talált: C: 58,00%, H: 7,20%, N: 11,70%. 17. lépés: H-Tyr-Ser-Phe-Leu-Gln-Asp-Pro-Glu-Thr-Ser-Leu-NH0 előállítása 20 8,5 g (55 mmól) védett undekapeptidamidot 20 ml trifluorecetsavban feloldunk, majd fél óra után a sűrű oldatot 250 ml éterrel eldörzsöljük, szűrjük, éterrel kimossuk. 7,8 g (99%) terméket 25 kapunk. R2 0,25—0,33. A fenti anyagot (52,3 mmól) feloldjuk 150 ml 80%-os ecetsavban és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A reakció végén a 30 katalizátort kiszűrjük, és az oldatot bepároljuk. A maradékot kb. 10 ml meleg vízben oldjuk és 150—200 ml acetonnal kicsapjuk. A csapadékot szűrjük, acetonnal mossuk és szárítjuk. 5,5 g (81%) terméket kapunk. Op.: 163° (boml.) R} 35 0,30—0,37. Analízisa: C5g H g7 O 20 N 1: ., (M; 1298,390) képlet alapján: 40 Számított: C: 54,57%, H: 6,74%, N: 14,05%. Talált: C: 54,50%, H: 6,80%, N: 14,05%). 2. példa: Z-Tyr-Ile-Pro-Lys(BOC)-Glu(OtBu)-45 -Gln-Lys(BOC)-N2 H 3 előállítása 1. lépés: Z-Gln-Lys(BOC)-OMe előállítása Feloldunk 15 ml vízben 2,8 g kálium-karbo-50 nátot, lehűtjük 0°-ra, hozzáadunk 3,3 g (11 mmól) e-terc.-butil-oxikarbonil-lizin-metilészter-klórhidrátot és 3x20 ml etilacetáttal kirázzuk. Az etilacetátos fázisokat egyesítjük, vízmentes magnéziumszulfáton megszárítjuk és csökken-55 tett nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot feloldjuk 20 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 4,6 g (10 mmól) karbobenzoxi-glutamin-2,4,5-triklórfenilésztert és szobahőmérsékleten 1 napig állni hagyjuk. 60 Az oldószert redukált nyomáson elpárologtatjuk, a párlási maradékot N citromsav oldattal eldörzsöljük, szűrjük, N citromsavoldattal, vízzel és éterrel mossuk. A nyersterméket 20 ml etilacetáttal kifőzzük, hidegen szűrjük, éterrel 65 mossuk és 50 ml metanol, 50 ml víz elegyéből 6
