161368. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagyaktivitású nizin-koncentrátumok előállítására

3 a megfelelő kicsapási körülmények megválasztásával kicsapva. A 844 732 sz. angol szabadalmi leírás szerint 1,4 X 10" egység/g aktivitású nizin-kon- 5 centrátumot állítanak elő 55%-os hozammal. Áz angol eljárás szerint a fermentált tejből a kazeint tej oltóval és kalciumkloriddal 6,0—6,3 pH-értéken kicsapják, a kicsapott részt feldarabolják, a savót 4,5 pH-értékre 10 megsavanyítják, a kicsapott kazeint kiszűrik és az abszorbeált nizin kitermelése céljából vízzel 4,0—4,5 pH-értékűre mossák. A szűrlet pH-értékét 5-re beállítják, 0,1% habképző anyagot adnak hozzá és az oldatot habképző 15 berendezés csövein cirkuláltatják keresztül. A képződött habot összegyűjtik és cseppfolyósítás után a nizin-koncentrátumot aceton jelenlétében kisózással elkülönítik. A csapadékot metanolban oldják, a nizin-koncentrá- 20 tumot a metanolos oldatból acetonnal kicsapják és szárítják. A 916 351 sz. brit szabadalmi leírás nizinnek utóerjedési cefréből történő izolálására 25 vonatkozik. Az utóerjedési cefrét papain, tripszin és pepszin behatásával készült tejhidrolizátum-tápanyag fermentálásával kapják. Az eljárás során az alapanyagból 0,1% felületaktív anyag hozzáadásával habot ké- 30 peznek, az összegyűjtött habot 2,5 pH-értékűre savanyítják, a nizint 25% nátriumkloriddal kicsapják, a csapadékot centrifugálják és liofilizálással szárítják. Ez a szabadalmi leírás a kitermelésre és a termékek aktivi- 35 tására vonatkozó adatokat nem közöl. A többi ismert módszer a megadott összetételű alapanyag jellegétől függően igen kis hozamú (max. 55%), a termékek aktivitása 40 alacsony (max.: 1,4><106 egység/g) és még más hátrányokkal is rendelkezik. Azt találtuk, hogy nagyaktivitású (8X106 égység/g) nizin-koncentrátumok állíthatók 45 elő igen jó (85%) hozammal, ha tejet, tejsavót, vagy glukóz vagy burgonyaszirup adalékot tartalmazó tejsavót, továbbá az N szerológiai csoportba tartozó Streptococcus tenyészet pepszines hidrolizátumát külön-kü- 50 lön vagy kombinálva tartalmazó tápanyagot fermentálunk. A fermentálás során kapott utóerjedési cefréből a fehérjéket 3,3—3,7 pH értéken és 60—120 C° hőmérsékleten kicsapjuk. A kicsapott proteinben (amely tej 55 vagy tejsavó tápanyag esetén pepszines hidrolizátumot is tartalmaz) jelenlevő nizint azzal a tejsavóval extraháljuk, amelyből a nizint előzőleg kivontuk. A nizinnek a tejsavóból és az extraktokból habképzéssel ka- 60 pott koncentrált vizes oldatait 3,5 pH-értéken kisózzuk. A kicsapott nizin-koncentrátumot acetonnal 0 C° hőmérséklet alá hűtve dehidratáljuk, majd szűrjük, és a visszamaradó acetont csökkentett nyomáson 0 C° 65 4 alatti hőmérsékleten eltávolítjuk. A találmány szerinti eljárással a nizin oldatot habképzéssel koncentráljuk. A találmány szerinti eljárással koncentrált vizes nizin-oldatok felületaktív anyag hozzáadása nélkül folyamatos módszerrel állíthatók elő, oly módon, hogy a cefre teljes mennyiségét mechanikus habképző berendezéssel habbá alakítjuk, így például nagyteljesítményű szivattyúval, amelybe a cefre és levegő 6 :1 arányú keverékét folyamatosan betápláljuk. Az így kapott habot tartályban szárítjuk; ennek fenekén kifolyó van a cefre részére, amelyből a nizint kitermeltük és a tetején egy tölcsérszerű kürtő, amelyben a hab öszszegyűlik. A száraz habot a kürtő és szívóhatás segítségével összegyűjtve az áramlási sebesség változtatásával cseppfolyósítjuk. A cseppfolyósított hab igen koncentrált nizinoldat. A cefre, amelyből a nizin egy részét kivontuk, a tartályból kifolyik és a nizin izolálási folyamatának következő lépésében, amikor a fenti eljárást megismételjük, istmét felhasználható. A műveletek ismétlésének száma a közeg habzási tulajdonságaitól és a szükséges koncentrációtól függ. Az egyes műveletek során kapott frakciók nizintartalma meghatározott és konstans. A folyamatot megfelelő számban ismételve a nizin-koncentráció százszorosára növelhető és az utolsó ismétlés után a cefre nizint már csak nyomokban tartalmaz (40 egység/g-nál kevesebb). A találmány szerinti eljárás kiviteli módját közelebbről az alábbi példákkal szemléltetjük, anélkül, hogy a találmány oltalmi körét ezekre korlátoznánk. 1. példa: 750 1 tejsavóból, 20 kg burgonyaszirupból és az N szerológiai csoportba tartozó Streptococcus tenyészet 250 1 pepszines hidrolizátumából álló tápanyagot nizint termelő Streptococcus lactis törzzsel fermentálunk. A fermentálás során kapott 1000 liter, 4200 egység/ml aktivitású utóerjedési cefrét 18%-os sósavval 3,5 pH-értékűre savanyítjuk. A keveréket 95 C°-ra 'melegítjük és 5 percig ezen a hőmérsékleten tartjuk, majd 25 C°-ra lehűtjük és a kicsapódott proteineket kiszűrjük. Ezt a szűrletet a leírt habképző műveletnek vetjük alá, az eljárást: két lépésben végezve. A protein-csapadékot (20 kg, amely 7000 egység/g nizint tartalmaz) 180 liter cefrével extraháljuk, amelyből a nizint előzőleg kivontuk, vagyis olyan savóval, amely 40 egység/ml-nél kevesebb nizint tartalmaz. A kapott extraktot szűrjük és háromfokozatú habképzésnek vetjük alá. A hab 32,5 1, 120 000 egység/ml aktivitású cseppfolyós frakciót szolgáltat. Ehhez a cseppfolyós 2