161368. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagyaktivitású nizin-koncentrátumok előállítására

161368 frakcióhoz 8,3 g nátriumkloridot adunk, a kicsapott szilárd anyagot a folyadéktól centrifugálással elkülönítjük és háromszor 15 1 acetonban szuszpendálva és —15 C°-ra hűtve dehidratáljuk. Az aceton utolsó nyomait 5 a csapadékból csökkentett nyomáson, —15 C°-on eltávolítjuk. 0,45 kg nizin-koncentrátumot kapunk, amelynek aktivitása 8,3X10° egység/g. 10 2. példa: 1000 1, 5500 egység/ml aktivitású utóerjedési cefrét, amelyet zsírtalanított tejnek ni- 15 zint termelő Streptococcus lactis törzzsel végzett fermentálása után kapunk, 18%-os sósavval 3,5 pH-értékre savanyítunk. A keveréket 95 C°-ra melegítjük és 5 percig ezen a hőmérsékleten tartjuk, majd 25 C°-ra le- 20 hűtjük és a kicsapott proteineket kiszűrjük. A szűrletet kétfokozatú habképzésnek vetjük alá. A protein-csapadékot (80 kg, mely 8000 egység/g nizint tartalmaz) 720 1 nizinmentes tejsavóval extraháljuk. Ezt az extraktot két- 25 fokozatú habképzésnek vetjük alá, ami 41,51, 120 000 egység/ml aktivitású cseppfolyós frakciót eredményez. E cseppfolyós frakció feldolgozását az 1. példában leírtak szerint végezzük. 30 A hozam 0,550 kg, 8,5X10" egység/g aktivitású nizin-koncentrátum. 35 3. példa: 4. példa: 1000 1, 2700 egység/ml aktivitású utóerjedési cefrét, amelyet tejsavénak és 20 kg burgonyaszirupnak nizint termelő Streptococcus lactis törzzsel végzett fermentálásával kapunk, 18%-os sósavval 3,7 pH-értékűre beállítunk, a cefrét 120 C° hőmérsékletre felmelegítjük, 5 percig ezen a hőmérsékleten tartjuk, majd 25 C°-ra lehűtjük. A kivált protein-csapadékot kiszűrjük és a szűr letet habképzésnek vetjük alá, a habképzést a szűrletből négyszer végezve. Az összegyűjtött habból, amelynek aktivitása 110 000 egység/ml, összesen 22,5 liter folyékony frakciót kapunk. Ehhez a frakcióhoz 5,6 kg (a frakció súlyának 25%-a) nátriumkloridot adunk. A kisózott csapadékot centrifugáljuk és 15 1, 0 C° hőmérsékletű acetonban háromszor szuszpendálva dehidratáljuk. Az aceton utolsó nyomait a csapadékból csökkentett nyomáson, 0 C° hőmérsékleten eltávolítjuk. 0,300 kg nagykoncentrációjú nizin-koncentrátumot kapunk, amelynek aktivitása 7,8X106 egység/g. 5. példa: 1000 1, 2700 egység/ml aktivitású ütóerjedési cefrét, amelyet 2% glukózt tartalmazó tejsavónak nizint termelő Streptococcus lactis törzzsel végzett fermentálásával kapunk, a 4. példa szerinti eljárásnak vetünk alá. Ekkor a 4. példáéhoz hasonló eredményt érünk el. 750 1 tejsavóból és az N szerológiai csoportba tartozó Streptococcus tenyészet 250 1 pepszines hidrolizátumából álló tápanyagot 40 nizint termelő Streptococcus lactis törzzsel fermentálunk. A fermentálás eredményeképpen kapott 1000 1, 3500 egység/iml aktivitású utóerjedési cefrét 18%-os sósavval 3,3 pH-értékűre savanyítjuk, 60 C°-ra felmelegítjük, 45 5 percig ezen a hőmérsékleten tartjuk, majd 25 C°-ra lehűtjük és a kicsapódott proteint kiszűrjük. Ezt a szűrletet a leírt módon habképzésnek vetjük alá, a habképzést a szűrletből kétszer végezve (kétfokozatú habkép- 50 zés). A kivált protein súlya 20 kg; ez 5500 egység/g nizint tartalmaz. Ezt a protein-csapadékot 180 liter cefrével extraháljuk, amelynek nizin-tartalma a nizin előzetes eltávolítása után kevesebb, mint 40 egység/ml. 55 Az így kapott extraktot szűrjük és háromszor habképzésnek vetjük alá. Az összegyűjtött habból, melynek aktivitása 115 000 egység/ml, 28,6 1 folyékony frakciót kapunk; ezt a frakciót az 1. példában leírt módon kezel- 60 jük, —20 C°-ra lehűtött acetont használva. 0,380 kg, nagyaktivitású nizin-koncentrátumot kapunk, melynek aktivitása 8,lXlOfi egység/g. 65 6. példa: 1000 1, 2000 egység/ml aktivitású utóerjedési cefrét, amelyet tejsavónak nizint termelő Streptococcus lactis törzzsel végzett fermentálása után kapunk, a 4. példa szerinti eljárásnak vetünk alá. 18,5 1, 100 000 egység/ml aktivitású folyékony frakciót kapunk, amely feldolgozás után 0,21 kg nagykoncentrációjú, 7,5X10" egység/g aktivitású nizin-koncentrátumot eredményez. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás nagyaktivitású nizin-koncentrátumok előállítására tejproteineket tartalmazó utóerjedési cefréből, ahol a cefrét szolgáltató, fermentálásra kerülő tápanyag tejet, tej savót, továbbá glukózt vagy burgonyaszirup adalékot tartalmazó tejsavót és az N szerológiai csoportba tartozó Streptococcus tenyészet pepszines hidrolizátumát, vagy a fenti komponensek kombinációját tartalmazza, a fermentálást a nizint termelő IPML 6 deponálási számú Streptococcus lactis törzzsel végezve, azzal jellemezve, 3