161211. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3 béta 11béta -dihidroxi-5 alfa 6alfa-epoxi-szterodiok előállítására
3 használunk. A kiindulási anyagban jelenlevő aciloxi-csoportok, pl. a 3-, ül. 21-aciloxi-csoport & mikrobiológiai átalakulás folyamán szabad hidroxil-csoporttá alakulnak át. A találmány szerinti eljárás esetében csak a megfelelő 11/J-hidroxü-vegyületeket kapjuk, amit IR- és NME-spektrumok segítségével egyértelműen ki lehetett mutatni. A találmány szerinti ll^S-hidroxüezés kívánt módon egységes lefutása a technika ismert állása alapján meglepő és előre nem látható. A találmány szerinti eljárás lefolytatásához csupán arra van szükség, hogy a felhasznált kiindulási szteroidok 3/?-hidroxi-, ül. 3/?-acüoxi-5a,6a-epoxi-csoporttal rendelkezzenek. A kiindulási szteroid előnyösen a pregnán- vagyandrosztán-sorba tartozhat. Ezen túlmenően tetszés szerinti további szubsztituenseket, így pl. szabad vagy funkcionálisan átalakított hidroxü-esoportokat, pl. la-, 14a-, 15a-, 16-, 17- és 21-helyzetben, célszerűen rövid szénláncú alkilcsoportokat pl. la-,- 2a-, 7a-, 16- és 18-helyzetben, szabad, vagy funkcionálisan átalakított keto-csoportot pl. 20-helyzetben tartalmazhat. Természetesen a 11-helyzetű szénatom a találmány értelmében ki van zárva egy esetleges további szubsztitúcióból. A mikrobiológiai hidroxilezés a szakemberek számára ismert módszerekkel történik. Így az általában szokásos előkísérletekkel állapítjuk meg a kedvező reakciófeltételeket az aerob szubmerz fermentáció számára. Az oldatként vagy szuszpenzióként hozzáadagolt szubsztrátum átalakulását próbaextraktumok vékonyréteg-kromatográfiás elemzésével követjük. A fermentáció befejezése után az eljárás termékét vízzel nem elegyedő megfelelő oldószerrel extraháljuk a tápoldatból, és az extraktumból pl. bepárlással és további ismert feldolgozási módszerekkel, pl. átkristályosítással és/vagy szilikagélen végzett kromatografálással tisztítjuk meg. A találmány szerinti eljáráshoz szükséges 3ß-hidroxi-, ül. 3/?-acetoxi-5a,6a-epoxí-szteroidokat a" megfelelő 3/j-hidroxi-, ill. 3/?-acetoxi-,/!5-szteroidokból a A5 kettős kötés önmagában ismert módon, pl. persavakkal végzett epoxidálása útján állíthatjuk elő. A kiindulási szteroid előállítását a 3/?-hidroxi-21-acetoxí-16«-metü-5-pregnén-20-on példáján közelebbről ismertetjük. 60 g 3/?-hidroxi-21-acetoxi-16a-metil-5-pregnén-20-ont oldunk 1,8 liter száraz metilénkloridban, 12 g nátriumacetátot (ömlesztve) és 40 g nátriumszulfátot (sicc.) adunk az oldathoz. +2 "C-on fél órán belül keverés közben 36 ml peroxiecetsavat csepegtetünk a reakcióelegyhez, maid még 12 g nátriumacetátot és 40 g nátriumszulfátot adunk az elegyhez, valamint egyidejűleg 36 ml peroxiecetsavat csepegtetünk hozzá. Utánkeverést végzünk, miközben 2 órán belül a reakcióoldat szobahőmérsékletre melegszik fel. Keverés közben 1 liter 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal semlegesítjük az elegyet, majd a metilénkloridos oldatot elkülönítjük, vízzel, ferroszulfát-oldattal és vízzel mossuk, nátriumszulfát fölött szárítjuk és vákuumban 4 40 °C-on betöményítjük. A maradékot etüacetátból átkristályosítjuk; o. p. 176/177—179 °C (hozamok: max. 85%a-epoxid). A kívánt 3-acetátokat az analóg ,d5-3-acetá-5 tok epoxidálásával vagy a 3/?-hidroxi-5a,6a-epo» xidok utólagos acetilezésével áüítjük elő. A találmány szerinti eljárás termékei értékese anyagok, amelyeket farmakológiaüag hatékony 11^-hidroxi-szteróid-vegyületek előállítására le-^ 10 het felhasználni. A találmány szerint előáüított vegyületek különösen gyulladásgátló hatású kortikoidok, mint pl. hidrokortizon, prednizolon vagy 6~ -dehidroprednizoion, 6a-metíl-prednizolon, ületve 15 9a-fluor-6a-metilprednizolon szintéziséhez alkalmazható. így pl. a találmány szerint előállított 3/?,ll/3,17a,21-tetrahidroxi-5a,6a-epoxi-pregnán-20-ont oxidáljuk és az epoxidgyűrű egyidejű 20 nyitásával 6a,17a,21-trihidroxi-4-pregnen-3, 11, 20-triont kapunk, amely könnyen átalakítható-17, 20:20,21-biszmetilénketállá. A biszmetilénketál dehidrogénezése és a 11--kétocsoport szelektív redukciója után 6-dehidro-25 hidrokortizon-biszmetilénketált kapunk, amely J^dehidrogénezés és ketál-lehasítás útján 6--dehidroprednizolonná vagy a zf6 -kettős kötés szelektív hidrogénezése útján hidrokortizonná alakítható. 30 Másrészből a 6a,17a,21-tríhidroxi-4-pregnen-3, 11, 20-trion biszmetilénketálját a 3-oxocsoport ketalizálása útján 17a,21~dioxi-3,3-etiléndioxi-pregnán-6, 11, 20-trion biszmetilénketáljává alakíthatjuk, amely ezután többek között J. H. 35 Friend [J. Amer. Chem. Soc, 82 (1959), 1235] és G. B. Spero [J. Amer. Chem. Soc, 79 (1957), 1515] ismertetett módszere segítségével 6a-metilprednizolonná vagy 9a-fluor-6a-metilprednizolonná alakítható. 40 A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa 45 2 literes olyan Erlenmeyer-lombikot, amely 500 ml, 30 percen át 120 D C-on autoklávban sterilizált és 1% kukoricalekvárból, l°/o szóiaporból és 0,005% szójaolajból álló, 6,2-es pH-értékre be-50 állított tápoldatot tartalmaz, Curvularia lunata liofilizált kultúrájával beoltunk és 30 °C-on 72~ órán át rotációs rázógéppel 145 fordulat/perc frekvenciával rázunk. Ez az előkultúra 20 1 térfogatú rozsdamentes acélból készült olyan 55 fermentor beoltására szolgál, amely 15 1 121 °C-on és 1,1 atü nyomáson sterilizált, 1% kukoricalekvárból, 0,5% keményítőcukorból, 0,005% szójaolajból álló és 6,2 pH-ra beállított oldatot tartalmaz. Habzásgátló anyagként Silicon SH 60 hozzáadásával 29 °C-on 0,7 atü nyomáson, levegőztetés (10 liter/perc) és keverés (220 fordulat/ perc) mellett 24 órán át kezeljük a tápoldatot, amelyből azután 1 liter mennyiséget steril körülmények között átviszünk 14 liter térfogatú 65 olyan közegbe, amelyet a fenti körülmények kö-2
