161211. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3 béta 11béta -dihidroxi-5 alfa 6alfa-epoxi-szterodiok előállítására

161211 6 zött sterilizáltunk, és amely 1% kukoricalekvárt, 1,25% szójaport és 0,005% szójaolajat tartalmaz. Azonos körülmények között végzett tenyésztés után 6 óra múlva 6 g 21-acetoxi-3/9,-17a-dihidroxi-5a,6ct-epoxi-pregnán-20-on 50 ml metilcelloszolvos oldatát adjuk hozzá. Az átalakulás lefutását fermentációs próbák metilizobutilketonos extraktumainak vékonyréteg-kromatográfiás elemzése segítségével követjük, ahol a kiindulási anyag csökkenését figyeljük meg. Teljes átalakulás (kb. 40 óra) után a fermentor tartalmát kétszer kikeverjük 10 liter metolizobutilketonnal, és az extraktumot 50 °C fürdőhőmérsékleten vákuumban bepároljuk. A 21-dezacetilezés a mikroorganizmus hatására megy végbe. A maradékot aceton és izopropiléter elegyéből átkristályosítjuk. Ilyen módon 3/?,ll/?,17a,21-tetrahidroxi-5a,6a-epoxi-pregnán-20-ont kapunk, 233—236 °C olvadásponttal; RF

: 0,13 [vékonyréteg, kovasavgél (E. Merck AG.), benzol:ecetészter 1:4]. 2. példa 4. példa szobahőmérsékleten 4 órán át tartó állás utárr 120 ml jéghideg 2 n kénsavhoz hozzákeverjük az. anyagot. 1 óra eltelte után a reakcióelegyet leszívatjuk, semlegesre mossuk, és szárítás után, 5 metanolból átkristályosítjuk. Ilyen módon 11/?-hidroxi-3/?,21~diacetoxi-5a,6a-epoxi-16a-metil-pregnán-20-ont kapunk, 195/196—197 °C olvadásponttal; RF

: 0,85 (benzol:etilacetát 1:4). 10 Az 1. példa szerinti módon hozzáadunk 15 g 25 S/J-hidroxi^l-acetoxi-öa^a-epoxi-pregnánt 260 ml metilcelloszolvban oldva Curvularia lunata 15 liter térfogatú növekvő tenyészetéhez, és mintegy 30 órán át fermentáljuk a tenyészoldatot. Az extrakciós maradékot etilacetátból átkristá- 30 lyosítjuk. Ilyen módon 55%-os hozammal 3/?,-ll/9,21trihidroxi-5,6a-epoxi-pregnan-20-ont kapunk 212—215 °C olvadásponttal; RF: 0,23 benzol :etilacetát 1:4). 35 3. példa Az 1. példa szerinti körülmények között hozzáadunk 15 g Sß-hidroxi^l-acetoxi-öa.öa-epoxi-16a-metil-pregnán-20-ont 150 ml metilcello- 40 szolvban oldva Curvularia lunata 15 liter növekvő tenyészetéhez, amelyet ezután kb. 30 órán át fermentálunk. Az extrakciós maradékot etilacetátból átkristályosítjuk. Ilyen módon 60%-os hozammal 3/9,1 l/9,21-trihidroxi-5,6a-epoxí-16a- 45 -metil-pregnán-20-ont kapunk, 203/206—209 °C olvadásponttal; RF: 0,2 (benzol:etilacetát 1:4). 50 Az 1. példa szerinti módon hozzáadunk 15 g 3/?-21~diacetoxi-5,6a-epoxi-16a-metil-pregnán-20-ont 150 ml metilcelloszolvban oldva 15 liter Curvularia lunata tenyészethez, amelyet ezután kb. 40 órán át fermentálunk. Az extrakciós ma- 55 radék átkrístályosítása után 3/?,ll/?,21-trihidroxi-5,6ct-epoxi-16a-metü-pregnán-20-ont kapunk, 207—208 °C olvadásponttal; RF

: 0,2 (benzol: etilacetát 1:4). A "3. és 4. példa esetén a kristályosítás anya- 60 lúgiaiból további 11/9-hidroxi-termékmennyiségeket lehet kapni 3,21-diacetáttá való acetilezés után. Ehhez 6 g anyalúgterméket 18 ml piri dinben oldunk, hozzáadunk 9 ml ecetsavanhidridet, és 65 5. példa Az 1. példa szerinti módon 3,75 g 3/?-hidroxi-5a,6a-epoxi-16ct-metil-pregnán-20-ont 20 ml 15 metilcelloszolvban oldva hozzáadunk 15 ml Curvularia lunata kultúrához, amelyet ezután 30 órán át fermentálunk. A metilizobutilketonos extraktum bepárlási maradékát a szennyezések eltávolítása céljából szilikagélen kromatografál-20 juk; ilyen módon 3/9,1 l/?-dihidroxi-5a,6a-epoxi-16a-metil-pregnán-20-ont kapunk, 156/158—1597 °C olvadásponttal; RF

: 0,40 (benzol:etilacetát 1:4). 6. példa Az 1. példa szerinti módon 3,75 g 3/9-hidroxi-5a,6a,16a,17a-diepoxi-16/?-metil-pregnán-20--ont 20 ml metilcelloszolvban hozzáadunk 15 liter Curvularia lunata kultúrához, amelyet azután kb. 60 órán át fermentálunk. A bepárolt metilizobutilketonos extraktum maradékát a szennyezések elkülönítése céljából szilikagélen kromatografáljuk. Ilyen módon 45%-os hozammal 3/9,ll/?-dihidroxi-5a,6a,16a,17a-diepoxi-16/?-metil-pregnán-20-ont kapunk, 215/217—219 °C olvadásponttal; RF

: 0,46 (benzol:etilacetát 1:4). 7. példa Az 1. példa szerinti körülmények között hozzáadunk 7,5 g 3/?-hidroxi-5,6«-epoxi-androsztán-17-ont 60 ml metilcelloszolvban oldva 151 Curvularia lunata kultúrához, amelyet kb. 40 órán át fermentálunk. A bepárolt metilizobutilketonos extraktum maradékát ecetsavból átkristályosítjuk. Ilyen módon 3/9,ll/9-dihidroxi~5a,6a-epoxi-androsztán-17-ont kapunk, 243—246 °C olvadásponttal; RF

: 0,42 (benzol:etilacetát 1:4). 8. példa Az 1. példa szerinti körülmények mellett hozzáadunk 3,75 g 3/U7a,21-trihidroxi-5,6a-epoxi-16a-metil-pregnán-20-ont 20 ml metilcelloszolvban oldva Curvularia lunata 15 liter térfogatú kultúrájához, amelyet kb. 35 órán át fermentálunk. A metilizobutilketonos extraktum bepárlási maradékát aceton és izopropiléter elegyéből átkristályosítjuk. Ilyen módon 3ß,llß,-17ot,21-tetrahidroxi-5,6a-epoxi-16a-metil-pregnán-20-ont kapunk; RF: 0,12 (benzol:etilacetát 1:4). 3