161004. lajstromszámú szabadalom • Eljárás PGF1 -típusú prosztaglandin-analógok előállítására

49 161004 50 C. A d,l-PGEi-metilészter észteráz-hidrolízise: Cladosporium resinae acilázt tartalmazó szupernatáns folyadékból 12 ml-t — melyet kb. három hétig fagyasztva tároltunk — és 129 mg d,l~PGEi-metilésztert elegyítünk, és kb. 20 órán keresztül szobahőmérsékleten nitrogén alatt rázatjuk. Az elegyet ezután 100 ml acetonnal hígítjuk, szűrjük és a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. Az így kapott maradék d,l-PGEi-et tartalmaz. A maradékot Silic ARCC—4-en (Mallinckrodt) króm a tograf áljuk. Az: oszlopot Skellysolve B-etilacetát és etilacetát-metanol eleggyel eluáljuk az alábbiak szerint: Frakció Oldószer .' 50 ml Skellysolve B 45 ml Skellysolve B+ 5 ml etilacetát 1. 40 ml Skellysolve B + 10 ml etilacetát 35 ml Skellysolve B + 15 ml etilacetát 30 ml Skellysolve B + 20 ml etilacetát 2. 25 ml Skellysolve B + 25 ml etilacetát 3. 20 ml Skellysolve B + 30 ml etilacetát 4. 15 ml Skellysolve B+35 ml etilacetát 5. 15 ml Skellysolve B + 35 ml etilacetát 6. 10 ml Skellysolve B+40 ml étilacetát 7. 10 ml Skellysolve B-l-40 ml etilacetát 8. 5 ml Skellysolve B+45 ml etilacetát 9. 5 ml Skellysolve B+45 ml etilacetát 10. 50 ml etil acetát 11. 50 ml etilacetát 12. 50 ml etilacetát +1% metanol 13. 50 ml etilacetát +1% metanol 14. 50 ml etilacetát . +2% metanol 15. 50 ml etilacetát +2% metanol 16. 100 ml etilacetát +3% metanol 17. 100 ml etilacetát +4% metanol A frakciókat bepároljuk és vékonyréteg-kromatográfiával analizáljuk. A 7—9. frakció d,l-PGEi-metilésztert (összesen 66 mg), a 10. és 11. frakció d,l-PGEi és d,l-PGEi-metilészter elegyet (összesen 20 mg) és a 12—-16. frakció d,l-PGEiet (összesen 33 mg) tartalmaz. 21. példa: d,l-8-izo-PGEi-metilészter az endo sorozatból. 47 mg 6-endo-(l',2'-dihidroxiheptil)-2:^-(6"-karbometoxihexil)-biciklo[3.1.0]hexán-3-on 2 ml száraz piridinnel készült oldatát jégfürdőben hűtve nitrogén alatt keverjük, majd az elegyhez 0,3 ml metánszulfonilkloridot adunk, és az elegyet az olvadó jégfürdőben 2 1/2 órán át tovább keverjük. Ezután az elegyet friss jégfürdővel újra lehűtjük, 10 ml hideg vízzel hígítjuk és 10 percig keverjük. Ezt követően jeget tartalmazó választótölcsérbe öntjük és három ízben, 25—25 ml-es részletekben, hideg etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatokat egyesítjük, 15 ml hideg vízzel, 15 ml hideg 10%-os kénsavval, 15" ml hideg vizes 10%-os nátriumkarbonát-oldattal és kétszer 15—15 ml hideg vízzel mossuk, majd nátrium-5 szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. így a 6-endo-(l',2'-dihidroxiheptil)-2^-(6"-karbometoxihexil)-biciklo[3.1.0]hexán-3-on biszmezilátját tartalmazó maradékot kapunk. Ezt a maradékot feloldjuk 2 ml xo acetonban és 1 ml vízben, majd szobahőmérsékleten mintegy 18 óra hosszat állni hagyjuk, ezután az elegyet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékhoz 10 ml vizet adunk és az elegyet három ízben, 20—20 ml-es részletekben, 15 etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatokat egyesítjük és 10 ml telített vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk, majd nátriumszulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A kapott maradék vé-2o kony-réteg-kromatográfiás analízis szerint (szilikagél-lemezen, előhívás etilacetáttal) d,l-8-izo-PGEt-metilészter. (Kitermelés 8 mg, R/ = 0,40). 25 22. példa: PGEj és 15-epi-PGEi az endo-sorozatból. 0,115 g 6-endo-(l',2'~dihidroxiheptil)-2a-(6"_karbometoxihexil)-biciklo'[3.1.0]hexán-3-on 4 ml száraz piridinnel készült oldatát jégfürdőben lehűtjük és nitrogén alatt keverjük,. miközben 0,6 ml metánszulfonilkloridot adunk hozzá. A keverést folytatjuk és hagyjuk, hogy a jégfürdő mintegy 2 1/2 óra alatt elolvadjon. A reakcióelegyet ezután egy friss jégfürdőben lehűtjük és 10 ml jég-víz keverékével hígítjuk, majd további 10 percig keverjük. Ezt követően az elegyet zúzott jeget tartalmazó választótölcsérbe öntjük és három ízben, alkalmanként 25 ml-es részletekben, hideg etilacetáttal extraháljuk. A hideg etilacetátos kivonatokat egyesítjük és hideg vízzel, hideg 10%-os kénsavval, hideg 45 vizes nátriumkarbonát-oldattal, és végül hideg vízzel mossuk, majd hátriumszulfát és kálium-* karbonát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson 40° alatti hőmérsékleten bepároljuk. A kapott maradék a 6-endo-(l',2'-dihidroxiheptil)-2a-(6"-karbometoxihexil)-biciklo[3.1.0]hexán-3--on biszmezilátjából áll. Ezt a maradékot feloldjuk 4 ml acetonban, majd hozzáadunk 2 ml vizet és az elegyet szobahőmérsékleten körülbelül 18 óra hosszat állni hagyjuk. Az elegyet ezután 5 ml vízzel hígítjuk és három ízben, alkalmanként 30 ml etilacetáttal, extraháljuk. Az etilacetátos kivonatokat egyesítjük és 5 ml telített vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson 40° alatti hőmérsékleten bepároljuk. 0,102 g maradékot kapunk, amely PGEi-metilésztért tartalmaz. Ezt a maradékot szilikagélen kromatografáljuk, eluálásra az alábbi oldószereket használjuk 15 ml-es rész-65 letekben: 30 35 40 50 60 25