161003. lajstromszámú szabadalom • Eljárás PGF1 típusú protaglandin- analógok előállítására
49 161003 50 C A d,l-PGEi-metilészter észteráz-hidrolízáse: Cladosporium resinae acilázt tartalmazó szupernatáns folyadékból 12 ml-t — melyet kb. három hétig fagyasztva tároltunk — és 129 mg d,l-PGEi-metiIésztert elegyítünk, és kb. 20 órán keresztül szobahőmérsékleten nitrogén alatt rázatjuk. Az elegyet ezután 100 ml aoetonnal hígítjuk, szűrjük és a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. Az így kapott maradék dJ-PGEj-et tartalmaz. A maradékot Silic ARGC—4-^en (Mallinckrodt) kromatografáljuk. Az oszlopot Skellysolve B-etilaoetát és etilacetát-metanol eleggyel eluáljuk az alábbiak szerint: Frakció Oldószer 50 ml Skellysolve 45 ml Skellysolve 1. : 40 ml Skellysolve 35 ml Skellysolve 30 ml Skellysolve •" 2. 25 ml Skellysolve 3. 20 ml Skellysolve 4. 15 ml Skellysolve 5. 15 ml Skellysolve 6. 10 ml Skellysolve 7. 10 ml Skellysolve 8. 5 ml Skellysolve 9. 5 ml Skellysolve 10. 50 ml etilacetát 11. 50 ml etilacetát 12. 50 ml etilaoetát 13. 50 ml etilacetát 14. 50 ml etilacetát 15. 50 ml etilacetát 16. 100 ml etilacetát 17. 100 ml etilacetát B B+ 5 B+10 B+15 B + 20 B + 25 B + 30 B+35 B4-35 B+40 B+40 B + 45 B+45 ml etilaoetát ml etilacetát ml etilaoetát ml etilacetát ml etilaoetát reú etilacetát ml etilaoetát ml etilacetát ml etilacetát ml etilacetát ml etilacetát ml etilacetát + 1% metanol + 1% metanol + 2% metanol +2% metanol + 3% metanol +4%, metanol A, frakciókat bepároljuk és vékonyréteg-kromatográfiával analizáljuk. A 7—9. frakció d,l-PGEi-metilésztert (összesen 66 mg), a 10. és 11. frakció d,l-PGEi és d,l-PGEi-metilészter elegyet (összesen 20 mg) és a 12—16. frakció d,l-PGEret (összesen 33 mg) tartalmaz. 21. példa: d,l-8-izo-PGEi-metilészter az endo sorozatból. 47 mg 6-endo-(l',2'-dihidroxiheptil)-2:/ ö'-(6 ,, -karbometoxihexil)-biciklo[3.1.0]hexán-3-on 2 ml száraz piridinnel készült oldatát jégfürdőben hűtve nitrogén alatt keverjük, majd az elegyhez 0,3 ml metánszulfonilklorídot adunk, és az elegyet az olvadó jégfürdőben 2 1/2 órán át tovább keverjük. Ezután az elegyet friss jégfürdővel újra lehűtjük, 10 ml hideg vízzel hígítjuk és 10 percig keverjük. Ezt követően jeget tartalmazó választótölcsérbe Öntjük és három ízben, 25—25 ml-es részletekben, hideg etilacetáttal extraháljuk. Az etilaoetátös kivolt) 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 na tokát egyesítjük, 15 ml hideg vízzel, 15 ml hideg 10%-os kénsawal, 15 ml hideg vizes 10%-os nátriumkarbonát-oldattal és kétszer 15—15 ml hideg vízzel mossuk, majd nátriumszulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. Így a 6-endo-(r,2'-diihidroxiheptil) -2ß-{6' '-karbome toxih exil)-bicikloi[3.1.0]hexán-3-on biszmezilátját tartalmazó maradékot kapunk. Ezt a maradékot feloldjuk 2 ml acetonban és 1 ml vízben, majd szobahőmérsékleten mintegy 18 óra hosszat állni hagyjuk,, ezután az elegyet csökkentett nyomásom bepároljuk. A maradékhoz 10 ml vizet adunk és az elegyet három ízben, 20—20 ml-es részletekben, etilacetáttal extraháljuk. Az etilaoetátös kivonatokat egyesítjük és 10 ml telített vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk, majd nátriumszulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomásion bepároljuk. A kapott maradék vékony-réteg-kromatográfiás analízis szerint (szilikagél-lemezen, előhívás etilacetáttal) d,l-8-izo"PGEt-métilészter. (Kitermelés 8 mg, R/ = 0,40). 22. példa: PGE] és 15-epi-PGEi az endo-sorozatból. 0,115 g 6-endo-(l',2'-dihidroxiheptil)-2a-(6"-karbometoxi!hexil)-biciklo{3.1.0]ihexán-3-on 4 mi száraz piridinnel készült oldatát jégfürdőben lehűtjük és nitrogén alatt keverjük, miközben 0,6 ml metánszulfonilklorídot adunk hozzá. A keverést folytatjuk és hagyjuk, hogy a jégfürdő mintegy 2 1/2 óra alatt elolvadjon. A reakciőelegyet ezután egy friss jégfürdőben lehűtjük és 10 ml jég-víz keverékével hígítjuk, majd további 10 percig keverjük. Ezt követően az elegyet zúzott jeget tartalmazó választótölcsérbe öntjük és három ízben, alkalmanként 25 ml-es részletekbein, hideg etilacetáttal extraháljuk. A hideg etilaoetátös kivonatokat egyesítjük és hideg vízzel, hideg 10%-os kénsavval, hideg vizes nátriumkarbonát-oldattal, és végül hideg vízzel mossuk, majd nátriumszulfát és káliumkarbonát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson 40° alatti hőmérsékleten bepároljuk. A kapott maradék a 6-endo-(l',2'-dihidroxiheptil)-2a-(6"-karbometoxihexil)-biciklo[3.1.0]hexán-3--on biszmezilátjából áll. Ezt a maradékot feloldjuk 4 ml acetonban, majd hozzáadunk 2 ml vizet és az elegyet szobahőmérsékleten körülbelül 18 óra hosszat állni hagyjuk. Az elegyet ezután 5 ml vízzel hígítjuk és három ízben, alkalmanként 30 ml etilacetáttal, extraháljuk. Az etilacetátos kivonatokat egyesítjük és 5 ml telített vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson 40° alatti hőmérsékleten bepároljuk. 0,102 g maradékot kapunk, amely PGEi-metilésztert tartalmaz. Ezt a maradékot szilikagélen kromatografáljuk^ eluálásra az alábbi oldószereket használjuk 15 ml-es részletekben: 25
