160967. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vinblasztin, vinleurozin és vinkrisztin vagy sói szelektív kinyerésére
160967 5 6 történő kivonatolását semleges vizes metanollal végezzük, majd a dimer alkaloidok dúsítására az alkaloid-elegyet — etanolban oldjuk és legfeljebb 10% szervetlen savat tartalmazó etanol adagolásával az oldat p#-ját 4—5-re állítjuk, vagy — annyi, legfeljebb 10% szervetlen savat tartalmazó etanolban oldjuk, hogy az oldat pH-ja 4—5 legyen, az oldatból a kívánt dimer alkaloidokat tartalmazó alkaloid-elegyet savaddíciós só alakjában kikristályosítjuk és elkülönítjük és az alkaloid-elegy savaddíciós sóit szerves oldószerelegyben oldva, vagy a savaddíciós sók. lúgosításával nyert alkaloidbázis elegyet szerves oldószerelegyben oldva vízzel részlegesen dezaktivált alumíniumoxidon, az oldószereleggyel azonos eluálószert alkalmazva kromatografáljuk, a frakciókból a dimert alkaloidokat kinyerjük, kívánt esetben tisztítjuk, kívánt esetben az egyedi dimer alkaloidokat savaddí— ciós sóiból felszabadítjuk, vagy valamely szervetlen savval savaddíciós sókká alakítjuk. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kivitele előnyösen az alábbi módon történhet: Őrölt rózsameténg drogot 5—20%, előnyösen 10% vizet tartalmazó metanollal több részletben kivonatolunk és a szűrt és egyesített metanolos kivonatokat csökkentett nyomáson gyakorlatilag metanol-mentességig besűrítjük. Ezután a vizes maradékot a nem alkaloid típusú kísérő-anyagok eltávolítása céljából híg kénsavval megsavanyítjuk és a keletkezett csapadékot kiszűrjük. A vizes-savas oldatot benzollal többször kivonatoljuk, majd az elkülönített vizes-savas fázist meglúgosítjuk és a lúgos-vizes oldatot alkaloid mentességig ugyancsak benzollal többször kivonatoljuk. A lúgos-vizes oldat kivonatolása útján nyert egyesített benzolos oldatokat csökkentett nyomáson szárazra pároljuk és így laza állományú, amorf barna színű alkaloidelegyet kapunk. Az alkaloidelegyet híg, legfeljebb 10% kénsavat tartalmazó etanolban feloldjuk oly módon, hogy egyúttal az oldat pH értékét 4,0—5,0-re állítjuk be. Az oldatot vinblasztinszulfát kristállyal beoltjuk és a .kristályosítást az edény falának kapargatásával megindítjuk, majd szobahőmérsékleten két napon át kristályosodni hagyjuk. A kivált, kiszűrt, a vinblasztin-, vinleurozin-, vinkrisztin-, továbbá kísérő alkaloidok szulfátjaiból álló kristálykeveréket feloldjuk és közvetlenül kromatografáljuk. Az oldást és az eluálást metilénklorid-kloroform 2:1 arányú keverékével, a kromatografálást vízzel részlegesen dezaktivált Al2 0 3 -al töltött oszlopon végezzük. Az 1—3 frakció a még jelenlevő kísérő alkaloidok zömét, a 2—9 frakciók a vinblasztint és a vinleurozint tartalmazzák. A vinkrisztin nyomokban a 9. frakcióban kezd megjelenni és eluálása a 18. frakcióval fejeződik be. A vinblasztin és vinleurozin tartalmú frakciókat szárazra pároljuk, majd etanolban oldjuk és a vinleurozin kikristályosítása után az anyalúgból a vinblasztint híg, legfeljeljebb 10% kénsavat tartalmazó etanollal szulfát alakban leválasztjuk, szűrjük, majd további tisztítás céljából kristályosítjuk, A vinkrisztint tartalmazó frakciókat szárazra pároljuk, majd a szárazmaradékot etanolban oldjuk és etanolos kénsavval savanyítva szufátsó alakjában leválasztjuk a vinkrisztint, amelyet 5 ugyancsak tisztítás céljából átkristályosítunk. A vinkrisztint tartalmazó frakciót úgy is feldolgozhatjuk, hogy a szárazmaradékot feloldjuk abszolút metanolban és kikristályosítjuk a vinkrisztin bázist, melyet a fentiekkel azonos mó-10 don, híg etanolos kénsavban oldva, kristályos szulfát leválasztása útján tisztítunk. Eljárhatunk úgy is, hogy az alkaloid-bázisokat kromatografáljuk, ez esetben a vinblasztin-, a vinleurozin-, a vinkrisztin-, továbbá a kísérő al-15 kaloidok szulfátjaiból álló kristálykeveréket vízben oldjuk, az oldatot ammóniával 8,0—9,0 pH értékre meglúgosítjuk, a lúgos oldatból az alkaloidbázisokat kloroformmal több részletben kirázzuk, az egyesített kloroformos oldatokat 20 vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk, szűrjük, majd csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A főtömegében a három dimer alkaloidot tartalmazó alkaloidbázis elegyet benzol-kloroform 1:1 arányú elegyében oldjuk és azt vízzel részlege-25 sen dezaktivált Al203-al töltött oszlopon kromatografáljuk. Az eluálást azonos összetételű oldószer-elegyben végezzük. Az 1—10 frakció a vinbalsztint és vinleurozint, a 13—17 frakció a vinkrisztint tartalmazza. A papír- ill. vékony-30 rétegkromatografálás útján azonosított vinblasztin-, és vinleurozin-, illetve vinkrisztin tartalmú frakciók feldolgozása a fentiekben leírt módon történik. A találmány szerinti eljárás részleteit az 35 alábbi példák szemléltetik: 1. példa: 100 kg szárított, főleg levélből álló, őrölt ró-40 zsameténg (Catharanthus roseus G. Don vagy Vinca rosea L.) drogot 1X600 liter, 2X400 liter 90%-os vizes matenollal kivonatolunk. A szűrt és egyesített metanolos kivonatokat 140— 150 liter térfogatig — gyakorlatilag metanol 45 mentességig — csökkentett nyomáson besűrítjük, majd a nem alkaloid típusú egyéb kioldott anyagok eltávolítása céljából azonos térfogatú 5%-os vizes kénsawal 2-es pH értékig megsavanyítjuk és a keletkezett sötétszínű csapadékot 50 szűrjük. A megszűrt vizes-savas oldatot 3X500 liter benzollal kivonatoljuk, majd az alkaloidokat tartalmazó, elkülönített vizes-savas fázis pH értékét tömény vizes ammóniumhidroxid oldattal 8,5—9,0-re állítjuk be. Ezután a lúgos-vizes 55 oldatot 3—4X600 liter benzollal kivonatoljuk. Az egyesített benzolos oldatot vízmentes nátriumszulfáttal, vagy káliumkarbonáttal megszárítjuk, majd a szűrt benzolos oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. Kb. 700 g laza ál-60 lományú, barna színű alkaloid-elegyet nyerünk. Az alkaloid-elegyet legfeljebb 10% kénsavat tartalmazó etanolban oldjuk, ügyelve arra, hogy az oldat pH értéke 4,0—5,0 között legyen. Az ol §5 datot vinblasztin-szulfát kristállyal beoltjuk, a 3
