160967. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vinblasztin, vinleurozin és vinkrisztin vagy sói szelektív kinyerésére

160967 3 4 Gyermekkori rosszindulatú keménydaganatos megbetegedéseknél is 94 esetből 65-ben jelentős regressziót értek el [SELAVRY, O.; HOLLAND, J. F.; WOLMSN, I. J.; Cane. Chemother. Rep., 52. 497 (1968)]. A rózsameténg gyógyászati szempontból számba jöhető dimer alkaloidjai: a vinblasztin, a vinleurozin és a vinkrisztin a növény minor alkaloidjai, azaz a növényben előforduló több mint 60 alkaloid közül éppen azok, amelyek igen csekély mennyiségben vannak csak jelen. A vinblasztin és a vinleurozin a növény összalkaloidjának mindössze 1—2%-a, a vinkrisztin pedig még ennél is százszorta kisebb mennyiségben fordul elő, érthető tehát, hogy a többi alkaloidtól való elválasztásuk, kinyerésük és gyógyászati tisztaságban való előállításuk igen gondos, az alkaloidok elválasztásánál ismert módszereknél lényegesen bonyolultabb eljárást igényel. A vinblasztin és a vinleurozin, továbbá a vinkrisztin kinyerésére több eljárás ismeretes [Noble R. L. és munkatársai: Ann. N. . Sei., 76. 882 (1958); 3 097 137 ÉS 3 205 220 sz. amerikai szabadalmi leírások; Svoboda G. H. és munkatársai: J. Am. Pharm. Assoc. Sei. ed. 48. 659 (1959); 153 200 és 154 715 sz. magyar szabadalmi leírások], amelyek mind a szárított drog savas vagy bázisos előkezelésén és szerves oldószer alkalmazásával történő kivonatolásán, a vizes oldatba vitt alkaloidok egy vagy két különböző pH értéken történő szerves oldószerbe való átoldásán, majd a szerves oldószerbe átoldott összalkaloid-elegy kromatográfiás frakcionálásán alapulnak. Így pl. Noble és munkatársai a drogot etanol-víz-ecetsav 9:1:1 arányú elegyével kivonatolják, majd a kivonat besűrítése után az alkaloidokat 2'%-os vizes sósav oldatba oldják át, Ezután a sósavoldat pH értékét lúggal 4-re tompítják. A gyengén savas oldatot benzollal kivonatolják, ily módon az alkaloidokat kísérő szennyezések nagy részét és a nem kívánt alkaloidok egy részét eltávolítják. A savas fázist, amely most már az alkaloidokat tisztább formában tartalmazza, 7-es pH értékre lúgosítják, az alkaloid bázisokat benzolba oldják át, majd a benzolos oldatot szárazra párolják. Ily módon az alkaloidokat bázis alakjában nyerik ki, majd oldás után kromatográfiás úton választják el. Svoboda és munkatársai a drogot először borkősavval kezelik, majd benzolos kivonatolást végeznek, a kivonatot besűrítik és az alkaloidokat 2% os borkősavoldattal kivonatolják. Ezután az oldat pH-értékét lúg adagolásával 3,2-re tompítják, majd az oldatot diklóretánnal egy benzollal kivonatolják. A két fázist elválasztják, a szerves fázis a nem kívánatos alkaloidok egy részét és az alkaloidokat kísérő szennyezéseket tartalmazza, a vizes fázis pedig a kívánt alkaloidokat nagy mennyiségű egyéb alkaloidok mellett. A vizes fázist 9-es pH-értékig meglúgosítják, majd diklóretánnal vaev benzollal kivonatolják, a szerves fázist bepárolják, majd ismert módon dezaktivált alumíniumoxidon kromatografálnak. A találmány az eddig ismert eljárásokkal szemben lehetővé teszi a többszöri fáziscserén és 5 a bonyolult kromatográfiás elválasztáson alapuló' eljárások lényeges egyszerűsítését, ül. hátrányaik kiküszöbölését, a kromatográfiás berendezés méreteinek jelentős csökkentését, továbbá az előállítani kívánt három dimer alkaloid egy-10 más melletti, egyidejűleg jobb nyeredékkel történő kinyerését, gyógyászatilag megfelelő minőségben. A találmány lényege az a felismerés, hogy a drogból előállított nagytömegű nyers alkaloid keverékből közvetlenül leválasztható egy 15 — zömében vinblasztinból, vinleurozinból és vinkrisztinből álló — alkaloidsó keverék, melyből viszonylag egyszerű módon nyerhetők ki a fenti komponensek. 20 Kísérleteink során azt találtuk, hogy e három dimer alkaloid az eddigi eljárásoktól eltérően, lényegesen egyszerűbb módon nyerhető ki, ha a kromatofráfiás elválasztás előtt a kívánt dimer alkaloidokat mintegy 70%-ban tartalmazó kon-25 centrációra dúsítják fel és ezt kromatografáljuk. A dúsítás oly módon végezhető, hogy a drogot semleges vizes metanollal kivonatoljuk anélkül, hogy a drogot a kivonatolás előtt vagy alatt lúgos vagy savas kezelésnek vetnénk alá és ez-30 által e kényes, könnyen bomló és a kivonat feldolgozása révén nyert alkaloidelegyből a három dimer alkaloidot a kísérő alkaloidok túlnyomó része mellől savaddíciós só alakjában, előnyösen szulfátsó alakban leválasztjuk. Ily módon kon-35 centrációjuk 30—40-szeresére nő, az eddig ismert eljárásokkal nvert kromatográfiás frakcionálásra kerülő alkaloid-elegyek koncentrációjához képest, minek következtében sokkal egyszerűbb és lényegesen kisebb méretű kromatográfiás be-40 rendezésre van szükség, mert a kívánt dimer alkaloidokat csak a kis mennyiségben jelenlevő kísérőanyagoktól kell elválasztani. Az eljárásunk szerinti kromatográfiás elválasztás előnyös egyszerűsödését és méretcsökkenését az 1 to 45 drogból nvert alkaloid-elegy kromatográfiás frakcionáláshoz szükséges AI2O3 mennyiségével jellemezhetjük legegyszerűbben, amely eljárásunkkal az eddig szükséges 240 kg-ról mintegy 20 kg-ra csökken. 50 A találmány tehát eljárás a rózsameténg (Vinca rosea L.) három dimer alkoloidjának a vinblasztinnak. a vinleurozinnak és a vinkrisztinnek szelektív kinyerésére bázis, vagy savaddíciós só alakjában a drog vizes metanollal törté-55 nő kivonatolása, a kivonatok gyakorlatilag metanolmentességig történő besűrítése, a bepárolt oldat megsavanyítása, szűrése, vízzel nem elegvedő szerves oldószerrel való kivonatolása, a vizes fázis meglúgosítása, az alkaloidoknak víz-60 zel nem elegyedő szerves oldószerbe való átoldása, majd a vízmentesített oldat szárazpárlásával nvert alkaloid-elegy kinyerése, a dimer alkaloidok dúsítása és részlegesen dezaktivált alumíniumoxidon végzett kromatografálása útján 65 azzal jellemezve, hogy a drog vizes metanollal 2