160813. lajstromszámú szabadalom • Eljárás PGA-típusú prosztaglandin-analógok előállítására
21 160813 22 Moftiliaceae, Demetiaceae, Tuberculariaceae, Actinoinycetaceae és Streptomyeetaceae családhoz tartozó fajták. Különösen előnyösek még továbbá az Absidia, Circinella, Congrcmella, Rhizopus, Cunninghamella, Calonectria, Aspergillus, Penicillium, Sporotrichum, Cladosporium, Fusarium, Nocardia és Streptomyces nemekbe tartozó fajták erre a célra. Az előnyösnek említett rendek, családok és nemek körébe tartozó mikroorganizmusokra példákat a 3, 290.226 számú USA szabadalomban találunk. Ezt az enzimatikus ésater-hidrolízist úgy valósítjuk meg, hogy a VII'. vagy IX'. általános képletű alkilésztert vizes szuszpenzióban valamelyik fentebb említett mikroorganizmus enzimtartalmú tenyészetével addig rázzuk, amíg az észter hidrolizálódik. Rendes körülmények között a 20—30 G° közötti reakcióhőmérséklet megfelelő. Rendszerint 1—20 óra reakcióidő elegendő ahhoz, hogy a kívánt hidrolízis végbemenjen. Többnyire kívánatos a reakcióelegynek levegőtől való elzárása, például argonnal vagy nitrogénnel. Az enzimet úgy kapjuk meg, hogy a tenyészetből a sejteket „levágjuk", ezt követően mossuk, majd újra szuszpendáljuk a sejteket vízben és azokat felaprítjuk, például üveggyöngyökkel végzett keveréssel, vagy szónikus vagy ultraszónikus rezgésekkel. A teljes vizes aprítási keveréket enzimforrásként használjuk. Más módszer szerint előnyös módon centrifugálással vagy szűréssel eltávolítjuk a roncsolt sejteket, és a vizes szupernatáns folyadékot vagy a szűredéket használjuk. Bizonyos esetekben előnyös, ha a mikroorganizmus-kultúra tenyésztését valamilyen alifás sav alkilészterének jelenlétében végezzük — az említett sav 10—20 szénatomot tartalmazhat míg az alkilgyök 1—8 szánatomos lehet — vagy pedig a tenyészethez ilyen észtert adunk, és a tenyészetet további növekedés nélkül tartjuk 1— 24 órán át a sejtek „levágása" előtt. Ezáltal a termelt enzim néha hatásosabb a VIP. vagy IX'. általános képletű észtemek szabad savvá történő u.aiakítására. Az erre a célra alkalmas alkilészterek közül példaképpen a metíloleátot említjük meg. . Ez az enzimatikus hidrolízis általánosságban alkalmas a prosztaglanditt-alkilésztereknek szabad savakká történő átalakításáfa; így nemcsak a VII'. és IX'. általános képletű alkilésztereknek megfelelő szabad savak előállítására használható, hanem egyéb ismert prosztaglandin-alkilészterek és analógjainak átalakítására, pl. a VIII. általános képletű észterek, továbbá prosztaglandin-észterek, mint pl. PGE2, PGE 3 , PGA 2 , PGA 3 és hasonlók átalakítására is megfelelő. Lásd: Bergstrom és szerzőtársai korábban említett közleményét és az abban idézett referátumokat, az ilyen enzimatikus eljárással hidrolizált más ismert prosztaglandin-alkilészterek tekintetében. Noha a VIP. és IX'. általános képlet alá tartozó észtereket — ahogy azt az előbbiekben már említettük — nem lehet könnyen hidrolizálni vagy elszappanosítani a megfelelő VII. és IX. ál-5 talános képletű szabad savakká, bizonyos észterek mégis átalakíthatók szabad savakká, más módszerek segítségével. Ezen észterek a halo-* génetilészterek, melyekben az Rt szubsztituens jg-helyzetben 3 klóratommal, 2 vagy 3 brómatom-10 mai, illetve 1, 2 vagy 3 jódatommal helyettesített etilgyök. Az ilyen észtereket, így például melyekben Rí —CH2 —CC1 3 , fémcínkkel és egy 2—6 szénatomos alkánsavval — előnyösen ecetsavval — végzett kezeléssel alakítjuk át a szabad sa^ 15 vakká. A cinknek előnyös fizikai formája a cinkpor. Amennyiben a halogénetilésztert kb. 25 C°on néhány órán át keverjük a cinkporral, úgy ez rendesen a VIP. vagy IX'. általános képletű észter halogénetil-gyökének csaknem teljes mér-20 tékben hidrogénatommal való helyettesítését eredményezi. A szabad savat azután ismert módszerekkel elkülönítjük a reakcióelegyből. Visszatérve mármost újból az A reakcióábrá-28 ra, ezeket a VIP. és IX'. általános képletű halogénetilésztereket a megfelelő XXVII. általános képletű bisz-szulfonsavészterekből állítjuk elo, ahol R7 jg-helyzetben 3 klóratommal, 2 vagy 3 brómatommal, illetve 1, 2 vagy 3 jódatommal — 30 előnyösen 3 klóratommal — helyettesített etilgyök. Ezeket a reakciókat úgy végezzük, ahogy azt az előbbiekben már más XXVII. általános képletű vegyületeknek VII'. általános kéoletű vegyületekké, illetőleg más XXVII. általános ,35 képletű vegyületeknek IX'. általános képletű vegyületekké történő átalakítására leírtuk. Azokat a XXVII. általános képletű bisz-szulfonsavésztereket, melyekben R7 ^-helyzetben 3 40 klóratommal, 2 vagy 3 brómatommal, illetve 1, 2 vagy 3 jódatommal helyettesített etilgyök, a megfelelő XXVI. általános képletű glikolokból állítjuk elő, a fentiekben más XXVI. általános képletű glikoloknak XXVTI. általános képletű 45 vegyületekké történő átalakítására már leírt módon. Azokat a XXVI. általános képletű glikolokat, melyekben R7 ^-helyzetben 3 klóratommal, 2 vagy 3 brómatommal, illetve 1, 2 vagy 3 jód-' 50 atommal helyettesített etilgyök, a megfelelő XXIV. általános képletű olefinek vagy XXV. általános képletű epoxidok hidroxilezésével állítjuk elő, ahogyan azt más XXIV. általános képletű vegyületeknek XXVI. általános képletű vess gyületekké, illetve más XXV. általános képletű vegyületeknek XXVI. általános képletű vegyületekké történő átalakítására már leírtuk az előbbiekben. Más módszer szerint ezeket a halogénetilésztereket a XXVI. általános képletű 60 glikolsavaknak (R7 hidrogénatom) a megfelelő halogénetanollal végzett észterezésével állítjuk elő, például /?,/i,/?-triklóretanollal, ha a kívánt halogénetilgyök —CH2CCI3. Ezt az észterezést úgy valósítjuk meg, hogy a XXVI. általános képletű 65 glikolsavat a halogénetanollal egy karbodiimid, 11
