160777. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szpiramicinszármazékok előállítására
3 160777 4 Ezt a- színképet .az 1. ábrán mutatjuk be. Az abszcisszára felvittük egyrészt a mikronokban kifejezett hullámhosszat (felső skála), másrészt a cm-1 -ben kifejezett hullámszámot (alsó •skála) és az ordinátára az optikai sűrűséget. A 2. és 3. ábra a .szpiramicin keverék, illetve a Sípiramlcit! I színképét mutatja ugyanolyan körülmények között felvéve, mint az 1, ábra. A három színképet megvizsgálva a következőket tapasztalhatjuk: : 1. a cukrok —OH csoportjára jellemző erős sávok 3480 cm_1 -nél és 1080—980 cm _1 -nélmind a három színképen megtalálhatók. 2. az —N(CH3 ) 2 csoportra jellemző közepes erősségű sávok 2820 és 2780 cm_1 -.nél mind a három színképben megtalálhatók, 3. a —CO— csoportnak (lakton, exociklikus észter és aldehid) tulajdonítható nagyon erős sáv a 2. és 3. ábra színképében hiányzik az 1. ábrán levő színképből. Csak egy közepes —CHO-nak tulajdonítható sáv látható 1715 cm_1-nél, 4. a —COO- csoportnak tulajdonítható erős sáv 1580 cm-1 -nél az 1. ábrán levő színképben hiányzik a 2. és 3. ábrán. A színképek vizsgálatának eredményét összefoglalva kitűnik, hogy a szpiramicin keverékkel vagy szpiramicin I-gyel összehasonlítva a találmány szerint készült termékekben hiányzik az észterfunkció, viszont jelen van egy —COO _ funkció. A nátrium tartalmú elszappanosított szpiramicin bakteriosztatikus hatását meghatároztuk több törzsön, összehasonlítva a szpiramicinével. A hígításos módszert alkalmaztuk, megállapítva áz anyagnak azt a legkisebb koncentrációját, amely meghatározott körülmények között megakadályozza a mikroorganizmusok minden látható fejlődését egy alkalmas táptalajon. Ezeket á legkisebb bakteriosztatikus koncentrációkat mikrogrammokban fejezzük ki a vizsgált közeg cm3 -ére számítva. 1. táblázat Legkisebb bakteriosztatikus koncentráció, Vizsgált baktérium jug/cm3 Na-tartalmú elrszpira- szappamicin nosított ! szpiramicin Staphylococcus aureus 209 P 4* 1000 Streptococcus faecalis ATCC 9790 0,5 1000 Escherichia coli Monod 250 1000 Welchia perfríngens 4 1000 * ezt az értéket kapjuk S. aureust nátrium tartartalmú elszappanosított szpiramicin jelenlétében (1000 /ig/ml) 3 hónapig tenyésztve. 5 A táblázatból kitűnik, hogy a nátrium tartalmú elszappanos'tott szpiramicinnek nincs bakteriosztatikus hatása, és nem vált ki rezisztenciát a szpiramicin antibiotikummal szemben. 10 Ällatok takarmányához adva az állatok súlya gyorsabban növekszik, mint ha azokat olyan takarmánnyal etetjük, amelyek nem tartalmaznak nátrium tartalmú elszappanosított szpiramicint. A találmány felöleli a hatásos elszappanosított szpiramicin mennyiséget tartalmazó állati takarmányokat vagy koncentrált készítményeket is. 20 A súlynövekedés előidézésére szükséges adag természetesen széles határok között változik állatfajonként és a takarmánynak magának a takarmányozási értékétől függően. Általában 25 elégséges, ha a takarmány tonnánként 5—50 g elszappanosított szpiramicint tartalmaz. A koncentrátumok 0,005—99,9% elszappanosított szpiramicint tartalmazhatnak. Elszappanosított szpiramicin minden állatnak 30 adható, de elsősorban a baromfiaknak és disznóknak. A következő példák szemléltetik a találmány gyakorlati végrehajtását korlátozás iszándéka nélkül. 1. példa: Bioszintézissel kapott, 68,5% szpiramicin I-et, 40 26% szpiramicin II-t és 5,5% szpiramicin Ill-at tartalmazó 3 g szpiramicin keveréket 85 ml ví2 és 35,8 ml 0,1 n nátriumhidroxid-oldat elegyében szuszpendálunk. A reakciókeveréket 18 óra hosszat kb. 20 °C-on keverjük, az anyag na-45 gyobb része feloldódik. A kevés visszamaradt oldhatatlan részt szűréssel eltávolítjuk, és a szűredéket 6 ízben 25—25 ml éterrel extraháljuk. A vizes fázist liofilizálva 2 g nyersterméket kapunk. 50 . Ezt a nyersterméket metanolban oldjuk, és 1,2 cm átmérőjű, 60 g szilikagélt tartalmazó oszlopon átbocsátva és 400 ml metanollal eluálva megtisztítjuk. ( Az oldószert 25 torr nyomáson elpárologtatva _5 1,6 g nátriumtartalmú elszappanosított szpiramicint kapunk. Nátriumtartalma 2,91% (elméletileg 3,03%). Rf = 0,13 (kovasavgél lemezen kromatografálva, oldószer: 1,2-diklóretán és metanol 65 : 35 térfogatarányban). A szpiramicin keverék Rf értéke 0,61. 60 2. példa: 120 g szpiramicin I-et 160 ml n nátrium-65 hidroxid-oldat és 3,2 liter desztillált víz. elegyé-2
