160678. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A16884 jelzésű antibiotikum előállítására
13 melés 26—30 °C-on érhető el. Általában az antibiotikum maximális termelése a táptalaj oltásától számítva 36—12 óra múlva következik be. Ahogy az az aerob, süllyesztett fermentációs 5 eljárásoknál szokásos, a táptalajon steril levegőt bmborékoltatunk áh Az organizmus megfelelő- növekedéséhez, és az AI6884 antibiotikum termeléséhez, a szükséges levegő mennyisége 0,2—0,4 térfogat levegő per perc tenyészettér- 10 fogat. Az előnyös levegőmennyiség 0,40 térfogat leveő/pere/tenyészettérfogat. A táptalajban levő antibiotikum koneéntrációját a fermentáció során könnyen, követhet- 15 jük, a táptalajminták gátló aktivitását olyan organizmusokkal szemben mérve, amelyeket az A16884 antibiotikum ismerten gátol. Ilye» célra alkalmasnak bizonyult a Sarcina lutea és a Salmonella gialtónaruna. A minták vizsgáiató-t a 20 JÓI ismert turbidinaeíriás vagy lemezes mód*ssserrel végeztük. Általában a maximális A16884 termelés a táptalaj; oltásától számított 3 napon belül ér- 2! faetőt eii,, süllyesztett aerob tenyészetbea vagy rázott lombikokban. Az A16884 fermentációja során keletkezett antibiotikus aktivitás a férmentlében van. Ezért 3< az A16884 antibiotikum» előállítására alkalmazott izolálási eljárás célja, hogy maximális antibiotikum kinyerést érjünk el a táptalajokból. Így például a micéliumot és az oldhatatlan anyagokat hagyományos módszerekkel, pl. szű- „, réssel vagy centrifugálással eltávolítjuk, a fermentléből, és az A16884 antibiotikumot extrakctó© vagy adszorpciós technikát alkalmazva tarjat fel a szűrt, vagy cenérifugált, íeEtnentlébőli Áz- A16884 adszorpciós, technikával történő .. kinyerésére különböző adszorbensek vagy ioncserélő gyanták használhatók, pl. szén, sziíikagél, alumimo és ioncserélő gyanták. A fermentáció során keletkezett A16884 antibiotikum a fermentációs körülményektől függően amfoter vagy- só alakban lehet jelen. Á formától függően azr antibiotikum valamelyik,, lent említett vagy ezekhez hasonló adszorbensre ráviheiŐ egy megfelelő* oldószeres, oldatból. Az adszorbeált A16884 antibiotikumot vagy sóját, ezután az. adszorbensről megfelelő- eluciós technikával eluál-Matjuk, például az. adszorbenst, amelyen, az AI 6884- antibiotikumait vagy sóját ezután azäadmilyen. oldószerrel mosva. Ha> az eluciót pl. a-mmómUttiformiát- vagy nátrúmiacetátoldattal mosva- végezzük, az eljárás során- az Al 688.4 antibiotikumot ammónium^- vagy nátaiumsójaként eluáljuk. Az ilyen sók, könnyen visszaalakíthatok a hagyományos elárásókkal AI6884 antibiotikummá. Az itt álló feltárási eljárás során adszorbensként mikrokristályos cellulóz is alkalmazható. Az A16884 antibiotikum sóit, kivéve az ammónium, és alkálifémsókat, előnyösen hagyományos, reakcióval állíthatjuk elő, azaz az amfoter 65 m 14 alakú A16884 antibiotikumot a- megfelelő bázissal vagy savval, reagáltatva. így savaddiciós sok előállításához, az- A16884 antibiotikumot egy szervetlen vagy szerves savval reagáltatjuk. Ilyen alkalmas savak pl. a sósav,, hídrogénbromid, hidrogén jodid, kénsav, foszforsav, ecetsav, benzoesav; szulfaminsav, borkősav, citromsav, maleinsáv, borostyánkősav, aszkorbinsav és glikolsav. Az Á16884 antibiotikum kationokkal is képez sókat, az A16884-et változatlan,, amorf alakjában szervetlen vagy szerves bázisokkal vagy sókkal reagáltatva. Ilyen sók pl. az ammóniumvagy szubszMtuált amiSóniumsQk; az alkálifémsók, nátrium-, kálium-,; ÍMvmn>* vagy rubidiumgéter az alkáliföldfémsóky pl. kalcium-, stroncium- vágy báríümsókv és a más fémekkel, pl. alumíniummal, rézzel* cinkkely magnéziummal és ezüsttel alkotott sók. Szerves bázisok esetén a bázis milyensége nem* kritikus, bár általában előnyös egy vizes, pH 3,0 feletti bázist alkalmazni. Ilyen alkalmas! bázis például a benzilamin, metilamin, dietilamin, trietilamin, prokain, diizopropilamin, etanolamin, ciklohéxiíamin, dicäklohexilamin, difenilamin, dir-n-butilamin, Mnolin és piridilamin. Általában előnyösek az A16884 antibiotikum gyógyászátilag alkalmazható; sói, Mindegyik só alkalmazható azonban az AÍ6884 antibiotikum előállítása, elválasztása és tisztítása során közbenső termékként. Gyógyászati célokra mind a kationos, mind az a-nisnos» gyógyászátilag alkalmazható sók egyenértékűek az A16884 antibiotikummal; bizonyos sófc különösen előnyösek valamilyen jó tulajdonságuk-, pl. oldhatóságuk miatt, amely a sóképző csoporttól függ. Ä találmány szerintii eljárás 1 könnyebb érthetősége miatt az alábbi példák kapcsán a találmányt részletesebben is ismertetjük. 1. példa: A16884 antibiotikum rázólombikban történő előállítása Spórás Stréptomyceá lipmanii! NRRL 3548 tenyészetet állítunk elő az-; organizmust a következő összetételű agar táptalajon csövön növesztve: dextrift 10,00 g kazélnhidrilzátum („N-Z-Analne--Type A", Sheffield chemical Company) 2,00 g élesztőextraktum 1.00 g marhahúsextraktum 1,00 g Meer agar (háromszor mosva), (előállítja: Meer Corporation} 20,00" g ionmentesített víz 1 liter A táptalaj pH-ját nátriumhidroxiddal pH 7,0-re állítjuk be. Az agarcsövet Streptomyces. lipmanii NRRL 3584 spóráival oltjuk be és 6 napig 30 °C-on inkubáljuk. Az agaros Gsőre ezután steril vizet 7
