160678. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A16884 jelzésű antibiotikum előállítására

160678 5 Táptalajhígításos módszer esetén kémcsősorozatot készítünk, különböző koncentrációjú A16884 antibiotikum monóámmóniumsót tartalmazó táptalajos csövekből,;; és ezt a tesztorganizmussal beoltva határozzuk meg az antibiotikum monoammóniumsójánafc azt a táptalajban, mog/ml-ben kifejezett minimális koncentrációját, amely az organizmus növekedését kb. 48 óráig gátolja. I. táblázat Tesztorganizmus Gátló koncentráció mcg/ml Escherichia coli EC 0127 Proteus PR6 Proteus PR4 Salmonella typhimurium 54 Salmonella typhosa T63 Staphylococcus aureus 3055 Staphylococcus aureus 3150 Pseudomonas aeruginosa X239 6,25 a.h. 1,56 a.h. 3,12 a.h. 3,12 a.h. 1,56 a.h. 50,00 a.h. >50,00 a.h. >50,00 a.h. 10 Az A16884 antibiotikum savhidrolizátumának aminosavanalízise Spackman—Moore—Stein technikával futtatva két ninhidrinnel reagáló foltot ad, melyek közül az egyik a glicinnel együtt fut (0,758 /miól/mg), a másik pedig a glicin előtt, és ez az a-aminoadipinsavval azonosítható (2,39 wnól/mg). Egy másik minta ugyanilyen analízise 0,49 ^mól/mg és 1,2 ftnól/ /mg értékeket ad. Több kémiai vizsgálatot végeztünk az A16884 antibiotikummal. Az antibiotikum ninhidrinnel, Pan Dutcher féle vizsgálattal Benedict, Molisch, jód és danzilkloríd reagensekkel pozitív reakciót ad, negatív viszont a Fehling, vas-III-klorid, biuret és Sakaguchi-reagensekkel végzett vizs- l?1 gálát. Az A16884 antibiotikum monoammóniumsója pH 3 és 9 közötti értéken 5 °C-on 8 napig stabil; viszonylag stabil pH 3—9 között 25 °C-on 4-napig; 100 °C-on pedig különböző pH-értékeken 5 percen belül elbomlik. A biológiai aktivitás lassan csökken pH 3—9 között; 37 q

C-on a felezési idő 4 nap. Az A16884 antibiotikum gátló hatású grampozitív és gram-negatív baktériumok növekedésére. Az egyes mikroorganizmusok növekedésével szemben mutatott gátló szinteket, részben tisztított A16884 moinoammÓTÚumsó esetén az I. táblázat mutatja. A gátlási szinteket agarhígításos vagy táptalajhígításos módszerrel ha- 30 tároztuk meg (a táblázatban a vizsgálat módját „a.h." illetve „t.h." jelöléssel adjuk meg). Az agarhígításos vizsgálat során a tesztorganizmust egy különböző koncentrációjú A16884 antibiotikum monóámmóniumsót tartalmazó 35 agarlemezsorozatra oltjuk, és megvizsgáljuk azt a minimális koncentrációt (mcg/ml-ben, azaz mikrogramm/ml-ben kifejezve), amely az organizmus növekedését 48 óráig (növénypatogén organizmusok esetén 72 óráig) gátolja. 20 25 40 45 50 55 60 65 6 (I. táblázat folytatása) Gátló koncentráció mcg/ml Salmonella flexneri SH3 6,25 a.h. Klebsiella aerobacter KI 6,25 a.h. Klebsiella aerobacter KA14 1,56 a.h. Mycobacterium avium X85 >50,00 a.h. Streptococcus pyogenes C203 3,12 a.h. Bacillus subtilis X12.1 3,12 a.h. Neurospora sp. M45—846 >5o|oO a.h. Sarcina lutea X186 6,25 a.h. Escherichia coli EC0127 7'so a.h. Kleibsiella aerobacter KA14 15,60 t.h. Salmonella typhosa SA12 31,20 t.h. Egyik esetben sem volt megállapítható lószérum kötődés. Mint az a fenti -táblázatból látható, az A16884 antibiotikum monoammóniumsója mind gram-pozitív, mind gram-negatív baktériumok ellen hatékony. Az A16884 antibiotikumnak még jobban tisztított monoammóniumsóját vetettük alá az előbbiekben leírt baktériumellenes hatás vizsgálatnak. Az eredményeket, amely a minimális, gátláshoz szükséges anyagmennyiséget mikrogramm/ml dimenzióban adja meg, a II. táblázatban láthatjuk. II. táblázat Organizmus 12 órás leolvasás 24 órás leolvasás Streptococcus pyogenes C203 64 128 Staphylococcus aureus 3055 128 >128 Escherichia coli EC14 8 8 Klebsiella aerobacter sp. KA14 8 16 Proteus sp. PR6 nincs növekedés 8 Proteus sp. PR17 2 8 Salmonella typhosa SA12 nincs növekedés 4 Salmonella typhimurium S4 nincs növekedés 4 Pasteurella multocida P3 nincs növekedés 2 Shigella sonnei I SH10 nincs növekedés 16 Az A16884 antibiotikum és sói in vivo is aktívak sok fenti organizmussal szemben, és ezért az ilyen mikroorganizmusok által háziállatokban okozott fertőzések gyógyítására használhatók. A részlegesen tisztított A16884 antibioti-3