160154. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-)-(cisz-1,2-epoxipropil)-foszfonsav előállítására
7 160154 8 zat szerint a butanolos oldatot vízzel extraháljuk, és így a (-)-(cisz-l,2-epoxiprop'il)-foszfonsav ammóniumsójának vizes oldatát kapjuk. Az ammóniumsó vizes oldatához kalciumhidroxidot adunk é^ a kapott oldatot csökkentett nyomáson melegítjük, így az antibiotikum kalciumsóját állítjuk elő. A megfelelő kalciumsót úgy is előállíthatjuk, hogy az .antibiotikum más kationokkal képzett sójának oldatát kalciumciklusú kationcser élő gyantán bocsátjuk keresztül. A kalciumsó 10 mg/ 10 ml koncentrációjú vizes oldatokból állás vagy keverés közben kikristályosodik. A szabad sav fehér, kristályos, 170 C°-on bomló szilárd anyag. A (-)-(cisz-l,2-epoxipropil)-foszfonsav és sói ér- 15 tékes antimikróbás hatású anyagok, amelyek mind a gram-pozitív, mind a gram-negatív kórokozó baktériumok növekedését gátolják. Az antibiotikum és sói a Bacillus, Escherichia, Staphylococci, Salmonella és Proteus kórokozók, és ezek 20 antibiotikum-rezisztens törzsei, pl. az Escherichia coli, Salmonella schottmuelleri, Salmonella gallinarum, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Proteus morganii és Staphylococcus aureus ellen hatékonyak. A (-)-(cisz-l,2-epoxipropil)-foszfonsa- 25 vat és sóit ennek megfelelően fertőtlenítőszerekként használhatjuk a gyógyszerészeti, fogászati és orvosi eszközökön tapadt mikroorganizmusok eltávolítására, valamint egyéb, az említett mikroorganizmusok fertőzésének kitett területeken. A 30 vegyületeket egyes mikroorganizmusok elkülönítésére is felhasználhatjuk mikroorganizmusok elegyeiből. A (-)-(cisz-l,2-epoxipropil)-foszfonsav sói továbbá az emberek és állatok bakteriális fertőzéseinek kezelésében is felhasználhatók, és 35 különös előnyük, hogy a rezisztens kórokozótörzsekkel szemben is hatékonyak. A sók különösen értékesek, ugyanis nemcsak orális adagolás esetén hatékonyak, hanem parenterális úton is beadhatók. 40 A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 45 1. példa * A foszfátpuff er összetétele: 91 g KH2 P0 4 95 g NA2 HP0 4 1000 ml desztillált víz Az oltólombikot 220 fordulat/perc fordulatszámú, 5 cm lökethosszú forgó rázógépen, 28 C°-on 1 napon át inkubáltuk. 6 db, egyenként 30 ml steril közeget tartalmazó, 250 ml-es Erlenmeyer lombikba 1,0—1,0 ml, fenti módon előállított oltóanyagot mérünk be. A •steril közeg összetétele a következő: Termelőközeg Mennyiség Zab 20,0 g 4 S szójababliszt 15,0 g Oldható cefre 5,0 g Nátriumcitrát 4,0 g Desztillált víz 1000 ml Polyglycol 2000 (közvetlenül a lombikba mérve) 0,5% pH = 6,5 Két lombikba ezután annyi vizes C0CI2 • 6H2O oldatot mérünk be, hogy az elegy végső kobaltkoncentrációja 0,0025 g/l legyen, két másik lombikba pedig annyi CoCl2 -6H 2 0 oldatot adunk, hogy a végső kobaltkoncentráció 0,025 g/l értéket érjen el. A beoltott lombikokat 220 fordulat/ perc sebességű, 5 cm lökethosszú forgó rázógépen 28 C°-on inkubáljuk. Három nap elteltével egy lombikot eltávolítunk, a negyedik napon egy második lombikot is félreteszünk. A lombikok tartalmát 8500 fordulat/perc sebességgel 10 percig centrifugáljuk, és a fermentlevet dekantálással elválasztjuk a szilárd anyagtól. Ezután a folyékony fermentleveket Proteus vulgaris MB— —838 teszt-organizmus segítségével megvizsgáljuk. A 3, ill. 4 napos inkubálás után kapott fermentlevekkel végzett vizsgálat eredményei a következők : Streptomyces fradiae NRRL B—3360 ferde agar-tenyészethez 10 ml steril lefölözött teiet adunk. Az így kapott szuszpenziót steril csövekben liofilizáljuk (egy-egy cső 0,1—0,2 ml szuszpenziót tartalmaz), és a fagyasztva szárított tenyészettel egy 250 ml-es Erlenmeyer lombikban levő 50 ml oltóközeget oltunk be. Az oltóközeg összetétele a következő: Mennyiség 55 SO Közeg CoCl2 -6H 2 0 Termelőközeg Termelőközeg Termelőközeg Növekedés, % 3 nap 4 nap szabad sav, jug/ml 0 0.01 g/l 0,10 g/l 29,4 34,6 37,1 26% 28,7 29,6 36,4 270/0 Kukoricakeményítő Élesztőhidrolizátum MgS04 -7H 2 0 Foszfátpuff er* Desztillált víz pH = 6,6 10 g 10 I 60 50 mg 2 ml 1000 ml 65 2. példa A (-)-(cisz-l,2-epoxipropil)-foszfonsavat az 1. példában leírt módon állítottuk elő. A vizsgálatok a következő eredményeket szolgáltatták: 4
