160154. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-)-(cisz-1,2-epoxipropil)-foszfonsav előállítására
160154 Közeg GoCl2 -6H 2 0 3 nap 4 nap szabad sav, /íg/ml Termelőközeg 0 19,3 20,0 Termelőközeg 0,1 g/l 26,2 24,2 Növekedés, % 36% 21% 3. példa Spatulahegynyi Streptomyces fradiae NRRL B—3360 ferde agar-tenyészettel oltóközeget oltunk be. • A ferde tenyészet összetétele a következő: Mennyiség Kukoricakeményítő Aszparagin K2 HP0 4 Agar H2 0 pH = 7,0 10,0 g 1,0 g 1,0 g 20,0 g 1000 ml Az oltóközeg összetétele a következő: Mennyiség Kukoricakeményítő K2 HP0 4 Nátriumcitrát Bacto-aszparagin D,L-methionin Mononátriumglutamát CaCl2 -2H 2 0 MgS04 • 7H2 0 FeS04 • 7H2 0 Nyomelannelegy ^z 2* Desztillált víz pH = 7,1 20,0 0,3 . 4,0 5,0 1,0 g 1,0 g 0,5 g 0,2 g 0,01 g 10 1000 ml ml A nyomiefemHelegy ^ 2 összetétele: Mennyiség FeS04 • 7H2 0 MnS04 • 4H2 0 CuCl2 • 2H2 0 CaCl2 H3PO3 (NH4 ) 6 Mo 7 0 24 • 4H2 0 ZnS04 • 7H2 0 Desztillált víz 10 15 20 25 30 35 40 45 50 1,0 g 1,0 g 55 25 mg 5Ö 100 mg 56 mg 19 mg 200 mg 1000 ml A beoltott lombikot 220 fordulat/perc forgássebességű, 5 cm lökethosszú forgó rázógépen 2 napig 28 C°-on inkubáljuk. 60 10 6 db, egyenként 30 ml steril közeget tartalmazó, ledugaszolt 250 ml-es Erlenmeyer-lombikba 1,0—1,0 ml fenti módon előállított oltóközeget mérünk be. A steril közeg összetétele a következő Termelőközeg Mennyiség 1,0 g 20,0 g 4,0 g 5,0 g 1,0 g 1,0 g 0,5 g 0,2 g 0,01 g 1000 ml K2 HP0 4 Kukoricakeményítő Nátriumcitrát Bacto-aszparagin D,L-methionin Mononátriumglutamát CaCl2 • 2H2 0 MgS04 • 7H2 0 FeS04 • 7H2 0 Desztillált víz pH = 7,1 Két lombikhoz ezután annyi vizes CoCl2 -6H 2 0 oldatot adunk, hogy az elegy kobalt-koncentrációja 0,0025 g/l legyein, két másik lombikba pedig annyi CoCl2 -6H 2 0 oldatot mérünk be, hogy az elegy kobalt-koncentrációja 0,025 g/l értéket érjen el. A beoltott lombikokat 220 fordulat/perc forgássebességű, 5 cm lökethosszú forgó rázógépen 28 C°-on inkubáljuk. Egy lombikot 3 nap múlva, egy másikat pedig 4 nap elteltével eltávolítunk. A lombikok tartalmát 8500 fordulat/perc sebességgel 10 percig centrifugáljuk, és a fermentlevet a szilárd anyagoktól dekantálással elválasztjuk. A folyékony fermentlevét Proteus vulgaris MB—838 teszt-organizmus felhasználásával vizsgálatnak vetjük alá. A 3, ill. 4 napig tartó inkubálás után kapott fermentlevek vizsgálatának eredményei a következők: Közeg CoCl2 „un ,, Szabad sav /tg/ml ' 6H 2° m 3 nap 4 nap Termielőközeg Termelőközeg Termelőközeg 4. példa 0 0,01 0,10 >2,0 22,5 25,8 >2,0 20,7 27,0 A (-)-(cisz-l,2-epoxipropil)-foszfonsav előállítását a 3. példában leírt módon végezzük. A vizsgálat során a következő eredményeket kaptuk: Közeg ^ ,-,, „TT ~ •, Szabad sav Mg/ml CoCl2 -6H 2 Og/l 3nap 4 ^ p 65 Termelőközeg Termelőközeg Termelőközeg 0,025 30,0 24,1 0,05 27,44 22,4 0,1 18,76 20,44 5
