160094. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4-(6-amino-purin-9-il)-4-deoxi-D-eitronsav előállítására
3 160094 4 csoportokat tartalmazó, erősen savas gyantákat, karboxi-csopor tokát tartalmazó gyengén savas gyantákat, kvaterner ammónium-esoportokat tartalmazó erősen bázikus gyantákat vagy primer-tercier amino-csoportokat tartalmazó gyengén bázikus gyantákat alkalmazhatunk; az erősen savas vagy bázikus gyanták felhasználása előnyös. A savas vagy bázikus ioncserélő gyantát savas vagy bázikus oldattal eluáljuk. Savas vagy bázikus oldatként vizes sósavat, vizes ammóniát, piridin-ecetsav puffert stb. használhatunk. Az eluátumot ezután — betöményítés és vizes oldás után vagy anélkül — a hatóanyag megkötése céljából adszorbensen vezetjük át. E célra pl. ioncserélő gyantákat, szilikagélt, alumíniumoxidokat, diatomaföldet, cellulóz pori. magnéziumszilikátot, kálciumszulfátot, Cephadexet, aktív szenet stb. alkalmazhatunk. Az adszorbenst szerves vagy szervetlen oldószerrel eluáljuk. Oldószerként pl. vizes ammóniát, vizes sósavat, vizes savas alkoholt, piridin-ecetsav puffert stb. használhatunk. A hatóanyag hatékony eluálása céljából előnyösen többlépcsős eluálási eljárást alkalmazhatunk, melynek során az eluáló oldószer koncentrációját fokozatosan változtatjuk. Az ultraibolya abszorpciós spektrumban 260 m/i körüli értéknél abszorpciót mutató frakciókat összegyűjtjük és — előnyösen vákuumban — szárazra pároljuk. Az ily módon kapott nyersterméket szükség esetén vízből kristályosíthatjuk. Megfelelő tisztaságú hatóanyag előállítása céljából a fenti adszorpciós és eluálási műveleteket megismételhetjük. A kristályos hatóanyag az alábbi fizikai-kémiai tulajdonságokkal rendelkezik: 1. Elemi analízis (80—90 °C-on 2 órán át szárított kristályokkal elvégezve): C% = 42,83; H% = 4,41; N*/0 ! = 26,96; 0% = 25,32. 2. Molekulasúly: A hatóanyag metilezése útján előállított metilészter (op. 231 °C, bomlás) molekulasúlya 276 (tömegspektrum alapján meghatározva). A hatóanyag acetilezése és metilezése útján •előállított diacetát-metil-észter (op. 225 °C, bomlás) molekulasúlya 351 (tömegspektrummal meghatározva). 3. Olvadáspont: 279 °C (bomlás). 4. Fajlagos forgatóképesség: [<OE]I28 D +31° (c = = 0,46 dimetilszuMoxidban). 5. Ultraibolya abszorpciós maximumok: A "ál 261 mfi (£=14,300). (Lásd 1. ábra.) .. ^ ml" HC! 260 m/A (e = 14,000). (Lásd 2. ábra.) *.ma x KEOH 261 m/j. (s=14,300). (Lásd 3. ábra.) 6. Infravörös abszorpciós maximum: A hatóanyag Nujol mullban 1690 cm-1 -nél jellemző sávot mutat (lásd 4. ábra). 7. Oldhatóság: a termék metanolban és etanolban oldhatatlan; vízben kissé oldódik, míg savas és lúgos vízben jól oldható. 8. Szín-reakció: negatív MoUisch-reakeió, orcinol-teszt és amomómum-molitodát-teszt; pozitív periodikus sav-Jbenzidin-teszt. A hatóanyag továbbá 8,01 ppm-nél (ö) és 8,15 5 ppm-nél (8) szinguletteket és 7,12 ppnunél (<3) széles szingulettet mutat két hidrogénatomra, mely magmágneses rezonanciában nehézvízre cserélhető. A termék diazometános metilezése és ecetsayanhidriddel piridinben végrehajtott di-10 acetilezése útján a karboxi-csoport és a két hidroxi-csoport helyzete feltételezhető. A fenti és más fizikai-kémiai tulajdonságok alapján a kristályos hatóanyag kémiai szerkezetét meghatároztuk és azt találtuk, hogy az 15 (I) képletű 4-(6-amino-purin-9-il)-4-deoxi-D-eritronsavnak felel meg. A kémiai szerkezet helyességét oly módon igazoljuk, hogy a kristályos hatóanyagot az alábbi szintézissel előállított 4--(6-amino-purin-9-il)-4-deoxi-D-eritronsav min-20 tával hasonlítjuk össze: 120 mg 4-(5,6-diamino-4npirimidinil-amino)-4--deoxi-2,3-0-izopropilidén-D-eritronsav (e vegyületet oly módon állítjuk elő. hogy 6-amino-5-nitro-4-klór-pirimidint 4-amino-4-deoxi~2,3-0~ 25 -izopropilidén-D-eritronsavval reagáltatunk és a kapott 4-(6-amino-5~nitro-4-pirimidinil-ai mino)-4-deoxi^2,3-0-izopropilidén-D-eritronsavat redukáljuk) 3 ml 90%-os hangyasavval képezett oldatát visszafolyató hűtő alkalmazása mellett ,0 1 órán át forraljuk. Lehűlés után a hangyasavat vákuumban ledesztilláljuk. A maradékhoz vizet adunk és az oldószert vákuumban ledesztilláljuk. A maradékhoz kevés vizet adunk, a kiváló kristályokat szűrjük, vízzel és metanollal mossuk, majd vízből átkristályosítjuk. Oszlopok alakjában 75 mg 4-,(6-ainmo-<5-f ormamid o-4--pirimidinil-amino)-4-deoxi-D-eritronsavat kapunk. Op. 190 °C (bomlás). 0,50 g 4-(6-amino-5-formamido-4-pirimidinil-aMiimo)-4-deoxi-D-eritronsav 5 ml n nátriumhidroxid-oldattal képezett oldatát forrásban levő vízfürdőn 10 percen át melegítjük. A reakcióelegyhez lehűlés után 5 ml n sósavat adunk és a kiváló kristályokat szűrjük, vízzel 45 és metanollal mossuk. 0,34 g 4-(6-amino-purin-9-il)-4-deoxi-D-eritronsavat kapunk. Op. 279 °.C (bomlás). [a]25 o = +30° (c = 0,93 dimetilszuMoxidban). Ultraibolya abszorpciós spektrum: 50 /-Sl° 261 m/i (£=14,700). Elemi analízis: C9HUN504 képletre számított: C% = 42,69; H% = 4,38; N% = 27,69 talált: C% = 42,38; H% = 4,22; N% = 27,53 55 A hatóanyag kifejezett hipokoleszterinémiás hatást mutat, melyet pl. az alábbi kísérlettel igazolhatunk: Wistar-törzshöz tartozó, 5 hetes patkányoknak (átlagos testsúly 74 g) az (I) képletű purin-származékot 0,4 mg/állat napi dózisban orálisan három egymás után következő napon beadjuk és az állatokat egyidejűleg 2% koleszterint, 1% kólsavat, 12% keményített olajat, 8% 65 húsextraktot és egyéb anyagokat tartalmazó 2
