159812. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 8 béta-hidroxiösztron előállítására
3 159812 4 pedig 0,05—5 mg/kg testsúly adagokban alkalmazható. A vegyület alkalmazási alakja a tabletta vagy az injekció. Injekció számára a vegyületet növényi olajban i(pl. szezámolajban) vagy sólében oldjuk, és parenterálisan alkalmazzuk. A követíkező példák szemléltetik az eljárást. A hőmérsékletieket CéMus-fokban közöljük. 1. példa: 8yWffidroxinlfl-nor-/J4 -andirosztén-S,<17-'dion A) Fermentálás A következő összetételű táptalajon (A): zalhUszit i20 g paradicsompép 20 g forró csapvíz 500 ml agar 15 g csapvíz .500 ml tenyésztett négy tíznapos ferde agaros Corynespora mekmis tenyészet felületi telepét 5 ml 0,0il%-os vizes wátriumlauolszulfonát-oldatiban szuszpendáljuk. A szuiszpenziöbál 1 ml-es adagokat felhasználunk tizenkét 250 ml-es Erlénmieyer-lomlbiklbian levő 5(0—50) jnH követkeő összetételű steril táptalaj (B) beoltására: 10 15 20 25 egyesített kloroformos kivonatokat vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfát fölött megszárítjuk, és vákuumban szárazira bepárolva fcb. 900 mg nyers terméket kapunk. Ezt az anyagot huszonnégy 40X20 cm méretű, kb. 1 mm-es koyasavgél i(GF Méndk) réteggel bevont üveglemezen kromatograíáljuk, 5 tf% metanolt tartalmazó kloroformmal kifejlesztve a 19-norandroszténdiont, és 1 : il térfogatarányú metanol-Moroform eleggyel eluálva. Az oldószer elpárologtatása után a maradékot elosztjuk klorofonm és 1:1 térfogatarányú vízr-metamol elegy között. A kloroformos fázisból vákuumban való szárazra bepárlása után kristályos 8/?-hidroxi-Jlö-nor-vJ^androsziténHSAV-diont kapunk. Ezt aceton és hexán elegyéből átkristályosítva tiszta terméket kapunk 208—2,10° olvadásponttal. A£?x3605, 1731, 11654, 1600 cm~ t^8,82, glükóz 30 g szójababliszt 20 g szájababolaj 2,2 g kalciumkarbonát 2,5 g desztillált vízzel kiegészítve 1 literre. 4,17 ppm. 2. példa: 8/9-Hidroxiösztron előállítása Corynebacterium simplex tenyésziatben A) Fermentáció A következő összetételű táptalajon (A): 30 glukóz 10 g élesztőkivonat 2',5 g dikáliumhidrogénfoszfát 1 g agar 20 g desztillált vízzel kiegészítve 1 Éterire t26°-om valló 712 órai inikutoálás után forgó rázógépen (2180 fordulat percenként, 5 cm löket) 5 tf%-ot átviszünk nyolc 250 ml-es Erlenmeyer lombikban levő 50—50 ml következő összetételű sterilizált táptalajba (C): 35 40 tenyésztett kéthetes ferde agaros Coryinebacterium simplex (ATOC 6946) felületi telepét 5 ml 0,01'%-os vizes nátriumaurilszulfonát-oldatban szuszpendáljuk. A szuszpenziából 1 ml-es adagokat felhasználunk két 250 ml-es Erlenmeyerlombiikban levő 501—50 ml következő összetételű steril táptalaj (B) beoltására: glukóz 10 g kulkoricalekvár 6 g „ húskivonat 1,5 g ammóniumdilhidrogéntfoszfát 3 g élesztőkivonat 3 g élesztőkivonat 2,5 g pepton 6 g kalciumkarbonát 2,5 g glukóz 1 g desztillált vízzel kiegészítve 1 literre. desztillált vízzel kiegészítve 1 literre. A fentiekkel azonos körülmények között végzett 24 órai inkuibálás után 500 /xg/inl szteroidot adunk a táptalajhoz, minden lombikot kiegészítve 19-nor-,/l4 -androsztén-!3,17-dion i nak N,,N-dimetílformamiddal ikészült 100 mg/ml koncentrációjú 0,26 ml steril oldatával. Összesen 2,0 g szteroidot fermentálunk. A fent leírt körülményekkel azonos körülmények között végzett 6 órai inkubálás után a lombikok tartalmát egyesítjük. B) Elkülönítés és jellemzés A kapott 4500 ml egyesített .fermentlevet 3 ízben 900 ml kloroformmal extraháljuk. Az 50 55 60 65 25°-on való 24 órai inkubálás után forgó rázógépen (280 fordulat percenként, 5 cm löket) 5 tf%-ot átviszünk két 250 ml-es Erlenmeyerlombikban levő 50—50 ml frissen sterilizált B táptalajba. További 24 órai azonos körülmények között végzett inkubálás után 500 jug/ml szteroidot adunk a táptalajihoz, minden lombikot kiegészítve 8i/?-hidfroxi-19-nor-d *-andr osztén-3,17-dionnak N,N-dtaetiMormamiddal készült 100 mg/ml koncentrációjú 0,25 ml steril oldatával. Összesen 50 mg szteroidot fermentálunk. További ,24 órai inkubálás után a lombikok tartalmát egyesítjük, és a fermentlevet 3 ízben 50—50 ml metinzobutilketoninal extraháljuk. Az egyesített kivonaitokat vákuumban szárazra be-2
