159812. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 8 béta-hidroxiösztron előállítására
5 159812 6 párolva kristályos 8^4hidroxiöszitront kapunk. Ezt kétszer aceton és hexán elegyéből átkristályosíítva kfo. 40 mg tiszta terméket, kapunk 260° olvadásponttal (bomlik). 1 mfx 315615, 3370, 1720, 1606, 1580, 1504 cm"'. 5 3. példa: 8^1-Hidroxiösztron előállítására Corynebacteriuim simplex mosott sejtjeivel 10 A 2. példa azerint járunk el, de a táptalajhoz előbb ftesztoszteront adunk Sl^hidroxi-líMior-/i^andDrosztén-SjilT-dion helyett, és a Corynebacterium simplex tenyészet sejtjeit 72 óra el- 15 múltával oentriifugálássial elkülönítjük. A sejtekéit 3 ízben literenként 0,005 mól káliumdithidrogénfoszfátot és ugyanannyi dinátriumdihidrogénpiroíosizfátot tartalmazó foszfátpuifferral mossuk, és az oldat pH-Jját 7,0 értékre állítjuk 20 be. Ezután a mosott sejtéket ugyanabban a fqszfátpufferban az eredeti tenyészet térfogata V4^ének megfelelő térfogatiban szuszpendáljuk, és a szubsztrátuimot, a S^-fhidroxi-lfl-nor-^4--anidrosztén-i3,17-dionit, és a hidrogénakceptort, 1$ például !2-;metil-na£tokinonrt, etanolos oldat alakjában adjuk a tenyészethez 100 jug/ml, illetve 0,4 mmól végső koncentrációnak megfelelő mennyiségiben; az etanol mennyisége nem haladja meg a teljes térfogat 5%Ját, A reakció- 30 keveréket 30°-on 4—6 óra hosszat állni hagyjuk, majd 2 ízben térfogata 1 A-| ének megfelelő •mennyiségű metilizobutilketonnal extraháljuk. A metinzobutilketonos kivonatot a 2. példában leint módon feldolgozva tiszta S^hidroxiöszt- 35 ront kapunk 2,60° olvadásponttal (bomlik). 4. példa: 40 8/?-'Hidroxiösztron előállítása Corynebacterium simplex acetonnial szárított sejtjeivel A 3. példa szerint eljárva a sejteket azonos térfogatú 7,0 pH^jú ífosafiátputfiferrai hígítjuk. Ezt ^ a sejtszuszpenziót állandó keverés közben hozzácsepqgtetjük tízszeres térfogatú, 5° alá lehűtött acetonhoz. A fenékre gyűlt csapadékot azonnal szűrjük szívással Büchner-tölcséren, kevés aeetannal mossuk, és levegőn megszárítjuk. A sejteknek a 7,0 pH-s pufferral Waring-keverőben készült, mL-enként 10 mg acetonnal szárított sejtet tartalmazó szuszpenzióját használjuk fel a 3. példa szerinti mosott sejtes szuszpenzió helyett. A szubsztrátumot és a hidtrogénakceptort a fent leírt módon adjuk hozzá. 1 rajz, 2 A kiadásért lelel: a Közgazdasági 7207577. Zrínyi (T) Nyomda, Budape Ugyanúgy inkubálíva és extrahálva 8j#-hidroxiösztront kapunk kristályos alakban 260° olvadásponttal (bomlik). 5. példa: 8/?-Hidroxiösztroti előállítása Corynebacteriuim simplex sejtmentes enzimkészítményből A 3. példa szerint eljárva a sejteket azonos mennyiségű finoman porított alumíniumoxiddal együtt mozsárba helyezzük, és 20 percig Raytheon magnietosztrikiciós oszcillátorral kezeljük. Az ultrahanggal kezelt keveréket 10 percig 20OO x G-vel centrifugáivá eltávolítjuk a sejttörmeléket és az aluimániumoxidoit. Egy mg 8'^-lhidroxi-li9-aioriandroszténdiont, 500 /*g 2~metilnaftokinont és 2,0 mg fent leírt sejtmentes A-gyűrű dehidrogenáz készítményt próbacsőben 0,03 mólos nátriumfoszfátpufferrel 5,0 ml térfogatra egíészíitünk ki. A keveréket 1 óráig 30°^on állni hagyjuk, majd két ízben 1—il ml metilizobutilketoninal extraháljuk. Az egyesített kivonatokat papíron kromatografáljuk, etiléngükolt használva stacioner fázisként és benzol és kloroform 1 :1 térfogatarányú elegyét mozgó fázisként. A 2. példa szerinti termékkel azonos R/-fel (0,119) mozgó foltot és azonos jellegzetes színreakciókat észlelhetünk. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az I képletű 8j/?-Mdroxiösztron előállításiára azzal jellemezve, hogy a H képletű 8/?-hidroxi-il9-,nor-J^androsztén-3,li7-diont valamely 1-dehidrogénező mikroorganizmus enzimatikus hatásának tesszük ki. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a II képletű vegyületet valamely 1-dehidrogénező mikroorganizmus aerób tenyészetében, asszimilálható szén- és nitrogénfomás jelenlétében 1-dehidrogénezzük. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy 1-jdeMdrogénező mikroorganizmuskénlt Corynebacterium simplexet, Nocardia restrietusít, Pseudomonas testosteronit, Cylindrocarpon radicicolát vagy Mycobacterium nhodocbroust használunk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal1 jellemezve, hogy az 1-dehidrogénezést Corynebacterium simplex elkülönített enzimjeivel hajítjuk végre. képlet és Jogi Könyvkiadó igazgatója. ;t V., Balassi Bálint utca 21—23. 3
