159720. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A 204 és A 204 II antibiotikumok előállítására és ilyen hatóanyagot tartalmazó kártevőirtószerek

159720 13 14 4. példa: 6. példa: Az A204 antibiotikumot az 1. példa szerinti eljárással készítjük az alábbi összetételű tenyészközegen : glukóz 10 g étkezési melasz 20 g pepton 5 g kalciumkarbonát 2 g A tenyészközeget csapvízzel 1 literre kiegészítjük. A fenti összetételű tenyészközegen előállított termék olvadáspontja 96—98 C° és mint A204 antibiotikum azonosítható. 5. példa: Az A2Q4 antibiotikum kísérleti üzemi (félüzemi) gyártása Az A204 antibiotikum előállítását süllyesztett tenyészközegen félüzemi méretben a következő módon végezzük: 25i0 ml-es lombikba 50 ml vegetatív közeget készítünk be. A vegetatív közeg 10 g/liter dextrózt, 25 g/liter oldható keményítőt, 15 g/liter tápszói adarát, 10 g/liter kukoricalekvárt és 2 g/liter kalciumkarbonátot tartalmaz csapvízben. pH-értékét nátriumhidroxiddal 6.5-re állítiuk be, majd az 1. példa iszerinti eljárással előállított 5%-os spóraszuszpenzióval beoltjuk olyan tenyészközeget tartalmazó agárról, amely 10 g glukózt, 10 g élesztőkivonatot, 5 g nátriumkloridot, 0,01 g vas(IB-szulfát-heptahidrátot, 0,2.5 g magnéziumszulfát4ieptahidrátot és 20 g agart (háromszor mosott) tartalmaz 1 liter ionmentes vízben. A beoltott vegetatív közeget kb. 30 C°-on 48 óra hosszat forgó-rázógépen (50 mm átmérőjű ív) inkubáljuk, a rázógépet 250 fordulatszám/perc sebességgel működtetjük. 16 ml így kapott vegetatív tenyészközeget 1 literes lombikban 200 ml vegetatív közegbe beoltunk. A beoltott vegetatív közeget kb. 30 C°-on 30 óra hosszat inkubáljuk 250 fordulatszám/perc sebességgel működtetett (50 mm ív) forgó-rázógépben. 200 ml így kapott vegetatív tenyészközeget 40 literes fermentorba beoltunk, amely 25 liter sterilizált vizes fermeritlét tartalmaz, amelynek összetétele a következő: 0,2 g/liter Dow Corning Antifoam, 25 g/liter dextróz, 15 g/liter szójadara, 3 g/liter melasz, 1 g/liter kazein és 2,5 g/liter kalciumkarbonát csapvízben. A fermentációt 30 C°-on 30 óra hosszat végezzük a beoltás után. A fermentlevet 420 fordulatszám/perc sebességgel keverjük a fermentáció közben. A levegőztetést úgy végezzük, hogy a fermentleven 0,4X0,028 m3 levegőt vezetünk át percenként. Az antibiotikum izolálását az 1. példa szerint végezzük. A kapott termék olvadáspontja 96—98 C° és mint A204 antibiotikum azonosítható. Az A204 antibiotikum sóinak előállítása a férmen tléből és a mioéliumból Az A204 antibiotikum alkálifém-, ammónium-és aminsóit a 7. példa szerint a fermentléből és a mioéliumból állítjuk elő oly módon, hogy a szűrt fermentlé és a micéliumkivonat vizes koncentrátumát a megfeMő alkálifém-, ammónium- vagy .aminhidroxiddal legalább 8,5 pH-értékre állítjuk be, az elegyet fele térfogat mennyiségű etilaeetáttal kétszer extraháljuk, majd a 7. példa szerint folytatjuk a feldolgozást. A szabad sav és sói számos keton, észter, alkohol, továbbá benzol-szénhidrogén keverékből átkristályosíthatók, vagy a szokásos módon, pl. Oszlopkromatográfiás úton tisztíthatók. 7. példa: Az A204 antibiotikum nátriumsójának előállítása 100 mg 1. példa szerint előállított A204 antibiotikumot 1 ml acetonban feloldunk, az oldathoz 1 csepp 5 n nátriumhidroxidot és 1 ml vizet adunk. Az anyagot gyenge felmelegítéssel oldatba visszük és —15 C°-on állni hagyjuk, míg kikristályosodik. A kapott kristályokat szűrjük és vizes alkoholból átkristályosítjük, amikoris 72 mg A204 antibiotikum nátriumsót kapunk, amelynek olvadáspontja 144— 145 C°. 8. példa: Az A204 antibiotikum káliumsójának előállítása A 7. példa szerint járunk el azzal a különbséggel, hogy 1 csepp 5 n nátriumhidroxid helyett az elegyhez 1 csepp 5 n káliumhidroxidot adunk. 9. példa: Az A204 antibiotikum ezüstsójának előállítása 670 mg A204 antibiotikum nátriumsót 40 ml metanolban oldunk, majd az oldathoz 270 mg ezüstnitrát 2 ml vízben képzett oldatát adjuk és az elegyet 3 óra hosszat szobahőmérsékleten sötét helyen álni hagyjuk. Az oldatot szárazra pároljuk, majd vízzel mossuk és a felesleges ezüstnitrátot eltávolítjuk. A maradékot 10 ml metanolban melegítés közben feloldjuk, zsugorított üvegszűrő-tölcséren forrón szűrüik és 50 C°-on 16 óra hosszat állni hagyjuk. Ekkor nagvméretű fehér négyszögletes kristályok alakiában az A204 antibiotikum ezüstsóiához jutunk, amelyet vizes acetonból átkristályosítunk. A fenti módon 450 mg ezüstsóhoz jutunk. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7