159720. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A 204 és A 204 II antibiotikumok előállítására és ilyen hatóanyagot tartalmazó kártevőirtószerek

159720 11 A találmány szerinti aantibiotikumok előállítását az alábbi példákban részletesebben ismertetjük: 1. példa: Az A204 antibiotikum rázölombikos előállítása tása. Az A204 antibiotikum előállítását rázölombikos tenyészetben az alábbi példán ismertetjük. A Streptomyces albus NRRL 3384 spóráit ferde tápagarra átoltjuk, amelyet l'O g dextrinből, 2 g enzimmel feltárt kazeinból, 1 g húsléből, 1 g élesztőkivonatból, és 20 g agárból készítünk, majd'vízzel 1 literre kiegészítjük. A-tápagart a Streptomyces albus NRRL 3384 spóráival beoltjuk és 30 C°-on 4—5 napig inkubáljuk. Az agart ezután steril desztillált vízzel fedjük és gyengén lekaparjuk, hogy a mikroorganizmust eltávolítsuk és abból vizes szuszpenziót készítsünk. Az így előállított spóraszuszpenzióból 1 ml-t használunk fel, 100—100 ml vegetatív közeg beoltására. A vegetatív tenyészközeget az alábbi komponensekből állítjuk eilő: 15 g glukóz, 15 g szójababliszt, 5 g kukoricalekvár, 5 g nátriumklorid, 2 g kalciumkarbonát, amelyet csapvízzel 1 literre feltöltünk. A vegetatív oltóanyagot 30 C°on 48 óra hosszat reciprok működésű rázógápen 5 cm lökethosszúság mellett 108 fordulatszám/ /perc sebességgel tenyésztjük. Az így kapott oltóanyagot használjuk fel az A204 termelésére az alábbi módon: .A következő összetételű tenyészközegeket készítjük el: 12 szójábafaliszt kazein nátriumnitrát glukózszirup k al ciumk arb onát csap víz 15 g/liter 1 g/liter 3 g/liter 20 g/liter 2,5 g/liter 100 ml tenyészközeget 500 ml-es Erlenmeyer lombikba helyezünk, amelyet 30 percig 120 C°on sterilezünk. Lehűtés után minden egyes Erlenmever lombikot az előbbi módon elkészített 5% vegetatív oltóanyaggal beoltjuk. A termeiléshez; használt lombikokat 48 óra hosszat 30 C°-on rázzuk forgó-rázógépben, amely 250 fordulatszám/perc sebességgel működik. A be nem oltott tenyészközeget 6-5—7,5 pH-értékek közé állítjuk be. A fermentációs ciklus végén a beért közeg 7,0—7,6 közötti pH-értékű. Antibiotikum -hatékonyság mind a fermentléfcen, mind a micéliumban mutatkozik. Az antibiotikum hatékonyságát úgy határozzuk meg, hogy mind a fermentlevet, mind a micéliumot lemezes módszerrel Bacillus subtilis-szal szemben megvizsgáljuk. A fenti módon előállított 25 liter fermentlevet vákuumban diatómaföld felhasználásával szűrjük. A micélium-lepéhyt háromszor fele térfogatnyi 50%-os vizes metanollal extraháljuk. 10 A három micéliumos kivonatot egyesítjük, és vákuumban a metanolt ledesztílláljuk. A leszűrt fermentlevet és a mieélium extraktumok vizes konoentrátumát egyesítjük, a keveréket sósavval 3 pH-értékre állítjuk be, majd az oldatot kétszer fele térfogatú etilaoetáttal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatokat egyesítjük, szárazra pároljuk, és kloroformban ismét feloldjuk (1 g szilárd anyagra 10 ml kloroformot számítunk). A kloroformos oldatot 12X40X25 mm méretű oszlopon átfolyatjuk, amely 1 g szilárdanyagra számítva 2 g Pittsfourgh-szenet tartalmaz. Az oszlopot 5—10-szer az eredeti térfogatmennyiségű kloroformmal extraháljuk. A kloroformmal eluált frakciókat egyesítjük,, vákuumban szárazra pároljuk, kisrnennyiségű forró metanolban feloldjuk, lehűtjük és a képződött kristályokat szűrjük. Átkristályosítás után 8,9 g A204 antibiotikumot kapunk kristályos alakban, amelynek aktivitása 1200—1400 mikrobiológiai egység/mg. Az A204 antibiotikum, kristályait mágneses mag-rezonancia, infravörös spektrum, vákonyréteg-kromatográfia 25 és papírkromatográfiás elemzések alapján azonosítjuk. A termék olvadáspontja 96—98 C°. 20 40 55 60 2. példa: Az A204 antibiotikum előállítása Az A204 antibiotikumot az 1. példa szerinti eljárással állítjuk elő, tenyészközegként azon-85 ban az alábbi összetételű közeget választjuk: glukóz szójababliszt kukoricalekvár nátriumklorid kalciumkarbonát 15 g 15 g 5 g 5 g 5 g A közeget csapvízzel 1 literre kiegészítjük. A tenyészközegben termelt antibiotikum olva-5 dáspontja 96—'98 C° és mint A204 azonosítható. 3. példa: - Az 1. példa szerinti eljárással A204 antibiotikumot állítunk elő az alábbi összetételű tenyészközegen: glukóz ammóniumszulfát kalciumkarbonát káliumklorid káliumdihidrogénfoszfát szójababliszt 20 g 5 g 8 g 4 g 0,4 g 5 g A tenyészközeget csapvízzel 1 literre kiegészíti ük. A tenyésZközegen előállított termék olvadáspontja 96—98 C° és mint A204 antibiotikum azonosítható. p,