159688. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bleomicin antibiotikumok előállítására
33 159688 '4. táblázat 34 Adalék Elkülönített bleomicin 1,4-diaminobután 2,0 120 4,9 140,0 686,0 Bleomicin A'2 N-(aminopropil)-l ,4--diaminobután 0,4 163 5,0 122,2 611,0 Bleomicin A5 71,8 1,232 88,5 12,9 44,7 2,543 113,7 18,6 4. példa: 4,0% porított szójababot, 1,0% élesztőkivonatot, 0,3% nátriumkloridot, 1,0% szójababolajat, 0,0007% rézszulfát-5 H2 Ot, 0,0001% vasszulfát • 7 H2 0-t, 0,0008% manganoklorid • 4 H2 0-t és 0,0002% cinkszulfát-7 H2 0-t tartalmazó tápközeg pH-értékét 7,0-re állítottuk be. 120—120 milliliter tápközeget egyenként 500 ml-es Sakaguchi lombikokba töltöttünk és sterilizáltuk. Erre a közegre ráoltottunk egy MA 267—Ai törzset, melyet 1965-ben Japánban a Musashino-dho, Saitama-Jsen-i talajból különítettünk el és amelyet a Streptomyces verticillus (ATCC 21 678) egyik olyan változataként azonosítottunk, mely specifikusan A5 bleomicint termel. Majd N-(3-aminopropil)-l ,4-diaminobután-f oszfátot, melyet Millipore szűrővel (kereskedelmi név) sterilizáló kezelésnek vetettünk alá, adtunk hozzá oly módon, hogy ennek mennyisége 0,5 mg/ml-et tett ki, és a törzset 7 napon keresztül 27 C°-on, percenként 130 fordulatszámú keverés mellett tenyésztettük. 5,2 liter tápfolyadékot gyűjtöttünk össze, szűrtük és a szűrletet (4,5 liter, hatóképesség 196 meg/ml, teljes hatóképesség 253 mg) extraháltuk, majd tisztítottuk az 1. példában leírt módon, ily módon 137 mg nyers, por alakú A5 bleomicin hidrokloridot kaptunk (hatókópesség 1,846 mcg/mg, teljes hatóképesség 253 mg). A kitermelés a tápfolyadékból 28,8%-os volt. A nyers, por alakú anyagot kromatografálásnak vetettük alá 25 ml Sephadex G—50-el töltött oszlopon, majd desztillált vízzel eluáltuk. A kapott kékszínű aktív frakciókat egyesítettük, és szárazra besűrítettük. 53,5 mg kék port kaptunk ((hatóképesség 2,613 mcg/mg, teljes hatóképesség 140 mg) és egyedül A5 bleomicint állítottunk elő. A nyers porból a kitermelés 55,4 %~os volt. Az így kapott termék extinkciója 293 m/x-nál 116 (El ° k cm ) volt, és a 6 n sósavval hidrolizált és gázkromatografálásnak alávetett termékben az oldallánc-beli N-i(3-aminopropil)-l,4-diaminobután-rész kimutatható volt. 25 35 40 45 50 55 60 65 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás bleomicin antibiotikumok előállítására, azzal jellemezve, hogy Streptomyces verticillus ATCC 15003 törzset asszimilálható szén-forrást, előnyösen maltózt vagy glukózt, asszimilálható nitrogén-forrást, előnyösen szójabab-lisztet vagy kukoricalekvárt és szervetlen sókat, előnyösen nátriumkloridot, káliumfoszfátot, cinkszulfátot és rézszulfátot tartalmazó vizes tápközegre oltunk és aerob módon tenyésztünk, és a tenyésztést valamely, legalább egy —C—CH2—NH 2 csoportot és legalább egy bázikus amino-, imino-, guanidin-, amidin-és szulfónium-esoportot tartalmazó aminovegyület vagy nitrogéntartalmú gyűrűs vegyület, vagy a tápközegben észterbontással, dezalkilezéssel vagy dekarboxilezéssel a fent említett aminovegyületté átalakítható vegyület jelenlétében végezzük, és az ismert A1; A 2 , A' 2 , A3 , A 4 , A 5 , A 6 , Bj, B 2 , B 3 , B 4 , B 5 vagy B 6 bleomicineket vagy az új bleomicineket ismert tisztítási eljárások alkalmazásával, előnyösen ioncserélőn, aktív szénen, alumíniumoxidon, vagy dextrán poliszacharid-típusú adszorbensen történő adszorpció útján elkülönítjük a tápközegből. (Elsőbbsége: 1970. február 13.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy aminovegyületként (VII), (IX), (X), (XI) vagy (XII) képletű vegyületeket használunk, ahol X (F), (II'), (HF), vagy (IV) képletű csoportot, R1 , R 2 hidrogénatomot, rövidszénláncú alkil-csoportot vagy (V), (VF), (VII'V (V1IF), (IX') vagy (X') képletű csoportot, R3 , R 4 , R 5 rövidszénláncú alkil-csoportot vagy (XF), (XIF), (XIIF), (XIV), (XV), i(XVI') vagy (XVIF) képletű csoportot jelent, ahol R6, R 7 , R 8 és R 9 je-17 Adalék koncentrációja (mg/ml) Tenyésztési idő (óra) Szűrlet mennyisége (liter) Hatóképesség (mcg/ml) Teljes hatóképesség (mg) Súly (mg) Hatóképesség (mcg/mg) Teljes hatóképesség (mg) Kitermelés a tenyésztési szűrletből (%)
