159280. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-aminotetrazolil-acetaminocefalosporánsav-származékok előállítására
7 159280 8 (átmérő 4,5 cm) szűrjük. Az egyesített szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot 30 ml tetrahidrofuránban oldjuk és annyi metanolt (kb. 100 ml) adunk hozzá, hogy enyhe színeződés lépjen fel. Légfürdőn és nitrogénáramban enyhén melegítve, az oldatot lassan koncentráljuk, mikoris 3-(dezacetoximetil)-3-benzöiltiometil-7-[5-ami,natetrazolil-aoetilamiino]-cefalosporánsav keletkezik. Op.: 190^193° (bomlás közben). Rf52 = 0,40; Rf|0M = 0,55. UV-spektrum (0,1 m ,nátrium!karbonátban): lmax 240 m/x-nál (£=16 500) és 276 m^-nál (f =19 900). A kiindulási anyagot a következőképpen állíthatjuk elő: 17,5 g 3-(dezaeetoximetil)-3~ben2oiltiom'etil-7--amino-cefalosporánisav (lásd a 650 444 számú belga szabadalmi leírást) és 12,5 ml trietilamin 1 liter dimetilfarmamidos oldatát egy óira alatt 9,2 g brómacetilbromid 100 ml metilénklaridos, erősen kevert és —13° és 15° közötti hőmérsékletre hűtött oldatához csepegtetjük (nitrogénatmaszférában). A hőmérsékletet 1,5 óra alatt lassan 10°-ira hagyjuk emelkedni, és itt tartjuk még egy óra hosszat. Ezután az oldószer nagy részét vákuumban, 0,5—1 Hgmm nyomáson szárazjég-aeeton hűtőelegyes hűtőt alkalmazva ledesztiláljuik. Az olajos terméket pH = 6 értékű foszfátpuf ferbe öntjük és 1 liter etilacetáttal kirázzuk. A két fázis határán csapadék keletkezik, melyet szűréssel vagy centrifugálással elválasztunk. Ezután a vizes fázis pH-ját 2-re állítjuk, konyhasóval telítjük és elválasztjuk a szerves fázist. A vizes fázist 600 és 400 ml etilacetáttal utánaextrafoáljuk. Telített konybasóoldatos mosás után a szerves fázisokat nátriumszulfát felett szárítjuk és egymásután 100 mg szilibagéles oszlopon szűrjük. A szűrletéket vákuumban szárazra pároljuk, a maradékhoz 30 ml etanolt adunk,. és —20°-on kiikristályosítjuik. 7,8 g 3-(dezacetoximetil)-3-benzoiltio;metil-7-brómacetilamino-cefalosiporánsav keletkezik. Op.: 137—138°. Rf,52 = 0,55. UV-spektrum vízben (nátriumsóiként) : lmax 243 m/t {«=16 800) és 275 ni//. (£=20 600). (a)20 D=—47° ± 1° (c=0,l m nátriumkarbonát-aceton 1 :1 elegyben). 3. példa: 2,51 g 3-(dezacetoximetil)-benzoiltiometil-7--[5^aminotetrazolil-acetilamino]-oefalosporánsavat 41,5 ml dioxán-pkidin (1 :1) elegyben oldunk, 12,2 ml 40%-<os vizes higanyperklorátoldatot adunk hozzá ós 45 percig 45°-on és 45 KHz ultrahangbesugárzással nitrogénatmoszfórában reagáltatjuk. Ezután lehűtjük, 6,5 ml tiöbenzoesavat adunk hozzá és 5 percig rázatjuk. Az oldószert vákuumban ledesztilláljuk és a maradék 65 ml vizes oldatát „Celite"-n szűrjük. A szűrletet egymásután 50 ml toluollal, kétszer 33—33 ml „Amberlite"—LA—2 66 ml toluolos oldatával és kétszer 50—SO ml toluollal 5 mossuk. Ezután a vizes fázist leszűrjük, mégpedig olyan oszlopon, melynek alulról felfelé a töltése: 4,1 ml „Sephadex" CM C—25 (H+-clklus), 16,5 ml „Alox", 4,1 ml „Zeo-karb" 226 (H+-ciklus), 16,5 ml „Alox", 4,1 ml „Dowex 1" 10 (acetátciiklus) és 4,1 ml „Sephadex" CM C—25 (H+-ciklus). A „Celite'^t, a szerves fázisokat és az oszlopot kétszer 15—15 ml vízzel utána extraháljuk, az oszlopot még 150 ml vízzel eluáljuk. Az egyesített eluátumokat vákuum-15 ban bepároljuk, a kevés csapadékot szűréssel eltávolítjuk és szárazra pároljuk. A maradékot kb. 50 ml abszolút etanollal digeráljub és így . kapjuk a tiszta 3^(dezacetoximetil)-3-piridiniometil-7-[5-aminotetrazolil-acetilamino]-oefalo-20 sporánsavat. (a)2oD = _|_ßo° ± 1° (c=l vízben); UV-spektrum: lmax 256 m/x (e=11600); Rf52 = 0,01; Rf10 iA = 0,10. NMR-spekítrum deutero-dimetilszulfoxidban 25 (100 Mc): Az alapmagra jellemző jelek mellett d = 4,96 ppm-nél szinglett lép fel, mely az arninotetrazolilacetilgyök —CH2-csoportjának" felel meg 30 és egy lapos alapú szinglett ő — 6,76 ppm-nél, a tetrazolgyűrű szénatomján levő —NH2 -csoportra. 35 4. példa: 10,8 g 7-(5-aminotetrazolil)-acetálamino-ce;fa. lospoiránsav nátriumsót 300 ml vízben oldunk, 37°-ra •melegít]ük és 0,2 n nátronlúggal pH 4Q 7,6-re állítjuk be. Ezután 240 mg acetilészteráz (Bacillus subtilis—ATCC 6633 törzsből nyerve, lásd az 1 080 904 számú belga szabadalmi leírást) kb. 5 ml vizes szuszpenzióját adjuk hozzá és a keletkezett ecetsavat folyamatosan 0,2 45 n nátronlúggal semlegesítjük (pH 7,6-re, hőmérséklet 37°). 5 óra múlva a reakció befejeződik. A pH-órtéket 6,5-re állítjuk, az oldatot G4-es üvegszűrőn szűrjük és liofilízáljuk. 11,88 g sárgás gyanta alakú 7-[5-amino1 tetrazolil]-ace-5Q tilamiino-O-dezacetil-cefalosporánsav keletkezik. 9,92 g ilyen nyersterméket 150 ml abszolút dimetilformiamidban szuszpendálunk és 0,15 ml (Bu3 Sn) 2 0 vegyületet (tributilónoxddot) adunk hozzá. Ezután 15 perc alatt 10,6 ml ß-kloretil._ izoicianát 45 ml dimetilformamidos oldatát csepegtetjük hozzá és még 1 1/4 órán át tovább keverjük. A reakcióelegyet leszűrjük és a szűrletet magas vákuumban szárazra pároljuk. A gyantás terméket háromszor 500—500 ml abszolút éterrel eldörzsöljük (az éterben oldható részt elválasztjuk és döntjük), majd 250 ml 10%-os pH = 6,7-es foszfátpuff erben felveszszük. Egymásután 1,5 liter és 0,5 liter etilacetáttal extrahálju'k. A szerves fázisokat kétszer S5 100—100 ml pH 6,7 pufíerrel visszaextraháljuk, 4
