159279. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 7-aminocefalosporánsav származékainak előállítására
159279 8 2. példa: 14,1 g 3-í(dezacetoximetál)-3-benzoiltiometil-7--brámacetilamino-ceíalosporánsavat feloldunk 60 ml dimetilformiamidban 10,5 ml N,N'-diiz3-propiletilaimin hozzáadása közben, majd hozzáadunk 2,52 g 10 ml dimetilformamddban oldott tetrazolt és 5 ml dimetilformamiddal utánaöblítjük. 46 órai szobahőmérsékleten való állás után intenzív keverés közben a jéggel hűtött reakcióelegybe 95 ml 1/12 ,n sósavat viszünk be. Az eközben keletkező barma, pelyhes csapadékot vékony „Hyflo"-rétegen leszűrjük és eldobjuk. A szűrletet a fent leírt módon további 505 ml 1/12 n sósavval kezeljük és a majdnem színtelen csapadékot szűréssel és 20 ml vízzel való mosással elválasztjuk. Ezt a nyersterméket kromatográfiás úton 340 g szilikagélt tartalmazó (5 cm átmérőjű) oszlopon klorofonm-acetoneleggyel tisztítjuk. A 3:1—1:1 térfogatarányú kloroform-aceton eluátumot vákuumban szárazra pároljuk, metanolban ismét feloldjuk és nátrium-a-etilihexanoáttal a 3-(dezacetoximetil)-3-benzoiltiometil-7-[tetrazolil^(l)-aicetilamino]-cefalosporánsav tiszta nátriumsójává átalakítjuk. UV-színkép vízben: /.mc és 275 mp. (s = 20 100). :: 243 m/x (« =15 800) Rf52 = 0,36; Rf 10lA = 0,48.A kiindulóanyagot a következőképpen állíthatjuk elő: 17,5 g 3-(dezacetoximetil)-3-benzoiltiometil-7--aminqcefalosporánsavat (1. 650 444 számú belga szabadalom) és 12,5 ml trietilamint feloldunk 1 liter dimetilformamddban és egy óra alatt hozzácsepegtetjük alapos keverés közben 9,2 ml brómacetilbromid 100 ml metilénkloriddal készült és —13° és —15° közötti hőmérsékleten tartott oldatáéhoz. A hőmérsékletet másfél óra alatt lassan 10°-ra hagyjuk emelkedni és ezen a hőmérsékleten tartjük még egy fél órán át. Ezután az oldószer legnagyobb "észét vákuumban 0,5—1 Híg mm-es nyomáson szárazjég-aceton hűtővel szemben ledesztilláljuk. Az olajos terméket 6^os pH értékű foszfátpufferre öntjük és 1 liter etilacetáttal kirázzuk. A két fázis határán csapadék keletkezik, amelyet szűréssel vagy centrifugálással elválasztunk. Ezután a vizes fázis pH-ját 2-es értékre állítjuk be, ezt konyhasóval telítjük és a szerves fázist leválasztjuk. A vizes fázist 600 és 400 ml etilacetáttal extraháljuk. Telített konyhasóoldattal való mosás után a szenves fázist nátriumszulfát felett szárítjuk, ezután 100 g sziliikagélle] töltött oszlqpon szűrjük. A szűrletet vákuumban betöményítjük, a maradékhoz 30 ml etanolt adunk és —20°-on kiikristályosítjuk. Ily módon 7,8 g 3^(dezacetoxi[metil)-í3Hbenzoiltiome-til-7-brómiacetila'mdno-cefalosporánsavat kapunk. 10 15 20 25 30 35 40 45 5Ü 55 60 65 Olvadáspont: 137—138°. Rf52 = 0,55. A nátriumsó UV-színképe vízben: f-max 243 m.iL \s = 16 800) és 275 m/x'(£ = 20 600). (a)w D == —47° ± 1° (c = 1; 0,1 mól nátriumbikaríbonát-aceton (1:1) elegyben. 3. példa: 4,32 g 3-(dezacetoximetil)-3-benzoiltiometil-7--[tetrazoil-i(il)-acetilamino]-cefalosporánsav-nátrdumsót 35 ml piridinben oldunk és ezt követően 35 ml dioxánmal kezeljük. Ezután 20,9 ml 40%-os hdganyperklorát-oldatot adunk hozzá és erőteljes keverés mellett 45 percig hagyjuk reagálni 45°-on (nitrqgénatmoszíéra). A reakcióelegyet lehűtjük, 11,1 nil tiobenzoesavat adunk hozzá és 5 percen keresztül rázzuk. Az oldószert vákuumban ledesztilláljük és a maradékot 140 ml vízben oldjuk, az oldatot „Celit"en leszűrjük. A szűrletet egymásután mossuk 90 ml toluollal, kétszer 55—55 ml 115 ml toluollal készített „Amberlite" LA-2-vel és kétszer 90—90 ml toluollal. Ezt követően szűrjük és a vizes fázist olyan oszlopom szűrjük, amely alulról felfelé számítva 8,5 ml „Sepbadex" CM— —25 (H+-forma), 34 ml „Alox", 8,5 ml „Zeo-karb" 226 (H+-forma), 34 ml „Alox", 8,5 ml ,,Dowex-l" (acetátforma) és 8,5 ml „Sephadex" CM^C—25 (H+-forma) összetevőkből áll. A ,,Celite"-et, a szerves fázisokat és az oszlopot kétszer 30—30 ml vízzel extraháljuk, az oszlopot ezen kívül további 200 ml vízzel eluáljuk. Az egyesített eluátumokat betöményítjük vákuumban, a kis mennyiségű csapadékot szűréssel eltávolítjuk és az oldatot szárazra pároljuk. A maradékot alkoholban digeráljuk és így a tiszta 3-(dezacetoximetil)-3-piridinio-metil-7--[tetrazolil-](l)-aoetilamino]-cefalosporánsavat kapjuk. (Ö )20 D = -j-4o° = ± 1° (c = 0,92, vízben). UV-színkép: ÁmQX 257 m/t, £ = 13 700. Rf52 = 0,01; Rf101 A = 0,11. 4. példa: 10,2 g 7-[tetrazolil-(l)-acetilamÍ!no]-cefalosporánsav-nátriumsót 300 ml vízben oldunk, 37°ra melegítjük az oldatot és pH-ját 0,2 n nátronlúggal 7,5 pH értékre állítjuk be. Ezután hozzáadunk 240 mg kb. 5 ml vízben feliszapolt acetilészterázt .(Bacillus subtüis ATCC 6633, lásd 1 080 904 számú belga szabadalom) és a képződött ecetsavat folyamatosan semlegesítjük 0,2 n nátronlúggal (7,5 pH értékre történő beállítás; hőmérséklet 37°). A reakció öt és fél óra után befejeződik. A pH-t 6,5-re állítjuk, az oldatot 94-es üvegszűrőn szűrjük és liofilizáljuk. Eredményként 1.1,49 g sárgás gyantaként a 7-[tetrazoldl^(l)-aicetil-amino]-0-dezacetil-cefalosporánsav nátriumsóját kapjuk. 4
