159096. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefalosporin C származék fermentléből való feltárására
g Ennek megfelelően, ha III általános képletű vegyületet diklórdimetil-szilánnal kezelünk, egy mól III általános képletű vegyületet (két egyenértéksúlynyit) legalább egy mólnyi (két egyenértéksúlynyi) diklórdimetil-szilánnal kezelünk. Hasonlóképpen, ha III általános képletű vegyületet klórmetilszilánnal reagáltatiink, egy mól (2 egyenértéksúlynyi) III általános képletű vegyületet legalább két mól (két egyenértéksúlynyi) klórmetilszilánnal kezelünk. Ez lehetővé teszi nem abszolút vízmentes oldószerek használatát, mivel a víznyomok a szililezőszerrel reagálva eltűnnek. Nyilvánvaló, hogy a szükséges szilánvegyület mennyisége attól függ, hogy a III általános képletű vegyület egy vagy két karboxil-csoportja képes-e szililészter képzésére. A reakcióegyenleteket az I. és II. rajzon szemléltetjük. A találmány megvalósítási módjait az alábbi példákban mutatjuk be: 1. példa „In situ" N-karbizobutoxi-cefalosporin C nátriumsójának előállítása (VI. képlet). 2900 liter, cefalosporin C tartalmú teljes férmen tléhez 108 kg szűrősegédanyagot és 300 ml szilikon habzásgátlót adunk, majd pH 6,9-en 10 °C-on leszűrjük. Ezután a szűrt táptalajhoz oxálsavat adva a pH-t 3,1-re állítjuk be, majd 30%-os kénsavval pH = 2 értékig savanyítjuk. 54 kg friss szűrősegédanyagot adunk hozzá, és az elegyet szűrjük. Az így kapott szűrletet pH = 2 értéken fele térfogatnyi metilizobutilketonnal (MIBK) extraháljuk, majd elválasztjuk. A MIBK fázist eldobjuk. Az extrahált táptalajhoz 1 / i térfogatnyi acetont adunk és a pH-t nátriumhidroxid-oldattal 7,85-re állítjuk be. 1000 liter szűrt táptalajra számítva 2 kg izobutilklorformiátot adunk az elegyhez keverés közben (5,9 mól izobutilklorformiát per mól cefalosporin C arányban). A pH-értéket 15%-os nátriumhidroxid-oldat adagolásával állandóan 7,8 és 8,0 között tartjuk, a hőmérsékletet úgy szabályozzuk, hogy az adagolás során 0 és 10 °C között legyen. A keverést addig folytatjuk, míg a pH további nátriumhidroxid-oldat adagolása nélkül is állandó marad, ez kb 2 óra múlva következik be. A pH-t 30%-os kénsav hozzáadásával 2-re állítjuk be és az acilezett táptalajt fele mennyiségű MIBK-al extraháljuk. A MIBK fázist vizzel mossuk, majd vákuumban 36 °C-on kezdeti térfogatának kb. V:s-ára koncentráljuk. A koncentrátum víztartalma kb. 0,2% (Kari Fischer). A koncentrátumot lehűtjük és pH 4,8-ig MIBK-os nátriumetilhexanöát-oldatot adunk hozzá. Az N-karbizobutoxicefalosporin C nát-10 riumsója kicsapódik és szűréssel elválasztjuk. A csapadékot MIBK-al mossuk, petroléterrel felszuszpendáljuk, szűrjük és vákuumban 40—60 °C-on szárítva 7,2 kg terméket kapunk. A hasz-5 nált táptalajt mérve 1%-nál kisebb cefalosporin C aktivitást találunk. Az elválasztott termék kb. 42—50% tiszta N-karbizobutoxicefaloporin C nátriumsó. A termék kielégítően tiszta a következő 7-amino-cefalosporánsav előállítására. 2. példa N-karbizobutoxi-cefalosporin C nátriumsójá-15 nak „in situ" előállítása. Az 1. példa szerinti eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy az ott alkalmazott 5,9:1 izobutilklorformiát :cefalosporin C mól-20 arány helyett 4,5:1 mólarányt alkalmazva 10,4 kg termék keletkezik. A használt táptalaj extrakció utáni mérése 14%-nál kevesebb cefalosporin C aktivitást mutat. 25 3. példa N-karbetoxi-cefolosporin C nátriumsójának „in situ" előállítása. 30 Az 1. példa szerinti eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy az ott alkalmazott izobutilklorformiát :cefalosporin C 5,9:1 mólarány helyett 7,0:1 etilklorf ormiát xefalosporin C 35 mólarányt alkalmazva az N-karbetoxicefalosporin C nátriumsóját állítjuk elő. 4. példa 40 N-karbobenzoxi-cefalosporin C nátriumsó „in situ" előállítása. Az 1. példa szerinti eljárásban az 5,9:1 izobu-45 tilklorf ormiát: cefalosporin C mólarányt 8,0:1 karbobenzoxiklorid: cefalosporin C mólaránnyal helyettesítve N-karbobenzoxicefalosporin C nátriumsót állítunk elő. 50 5. példa „In situ" N-(N'-butilkarbamoil)-cefalosporin C előállítása (VII képlet). 55 2900 liter, cefalosporin C-tartalmú teljes fermentlevet 108 kg szűrősegédanyaggal és 300 ml szilikon habzásgátlóval keverünk, majd 10 °C-on pH 6,9 mellett szűrjük. 60 Ezután a szűrt fermentlé pH-ját oxálsavval 3,1-re állítjuk be, majd 30%-os kénsav hozzáadásával pH = 2-re. 54 kg friss szűrősegédanyagot adunk hozzá és az elegyet leszűrjük. Az így ka-65 pott szűrletet fele mennyiségű metilizobutilke-5
