159096. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefalosporin C származék fermentléből való feltárására
3 kinyerési eljárás során a nyers cefalosporin C-nek a fermentléből történő adszorpcióját egy alkalmas adszorbensen, pl. faszénen, valamilyen ioncserélő gyantán vagy hasonló anyagon végezték, majd ezt követőén eluálták, koncentrálták és izoelektromos pontján kicsapták vagy sót képeztek (lásd a 3 094 527 sz. USA szabadalmi leírást). Az eljárás során minden egyes lépés bonyolult összetett jellegével párosuló alacsony hatásfok igen megnehezíti a 7-ACA gyártását. A szemiszintetikus cefalosporinok felépítési alapja a II. képlet szerinti szerkezetű 7-ACA. A 7—ACA-t leginkább a cefalosporin C-nek vagy származékainak kémiai úton történő részleges lebontásával állítják elő (lásd a 3 124 576, 3 188 311 és a 3 234 223 sz. USA szabadalmi leírásokat). Ezek az eljárások is nemkívánatosán alacsony kereskedelmi termelést adnak. Ezenkívül ezekhez az eljárásokhoz kiindulási anyagként változatlanul tisztított cefalosporin szükséges, ez pedig nehezen állítható élő. Ezért merült fel az igény olyan eljárás kidolgozására, .amely javítja a cefadosporiin C fermentléből történő kinyerésének termetesét olyan kémiai alakban, amely közvetlenül, minden lényeges tisztítási folyamat nélkül felhasználható a 7-ACA termelése során a következő hasítási reakciókban. A találmány tárgya eljárás a III. általános képletű cefalosporin C származékok „in situ" előállítására és kinyerésére, ahol a képletberi B —NHR vagy —OR csoport, R rövidszénláncú alkil-<, de leginkább etil-, n-propil-, izöpropil, n-butil- vagy izobutil-gyök, vagy R, -(CH2 ) n -^ (^> \_/V általános képletű gyök, melyben n értéke 1—6, ha B —OR csoport, és 0—6, ha B —NHR csoport és Rj és R3 egyaránt vagy egymástól eltérően hidrogén-, klór-, bfórhvagy fluoratom, nitrocsoport, rövidszénláhcú alkilgyÖk vagy rövidszénláneú alköxi-esoport, de előnyösen hidrogénatom. Ag eljárást az alábbi műveletek egymásutánja jellemzi: (A) Savval inkubált, előnyösen előzőleg leszűrt, cefalosporin C-t tartalmazó fermentléhez egy acilezőszert, mégpedig R__N=C=0 általános képletű izocianátot, vagy O lí X—C—O—R 4 általános képletű haloformiátot adunk, melyekben R a fent megadott jelentésű és X klór-, bróm- vagy jódatom, egy mól cefalosporinra legalább két, de előnyösen 2—10 mól acilezőszert s számítva, legelőnyösebben 5—8 mól acilezőszer per mól cefalosporin C arányban, 7—9, előnyösen 8 pH-értéken, —20 és +60 °C közötti, előnyösen —5 és +20 °C közötti hőmérsékleten, hogy a megfelelő cefalosporin C származék ke-10 letkezzen, és (B) a kapott cefalosporin C származékot extrakcióval, vízzel nem elegyedő szerves oldószert, pl. metilizobutilketont, butanolt, etilacetátot és 15 ezekhez hasonló oldószereket, de előnyösen, ha B —OR csoport, metiMzdbutilfeeltonit, és ha B •' —ÍNHR csoport, n-butamolt alkalmazva, 1 ós 3 közötti, előnyösen 2 pH-éntékan feltárjuk. 20 A leírásban használt „rövidszénláncú alku" kifejezés 1—10 szénatomot tartalmazó alkilgyököt, pl. metil-, etil-, n-propil-, izöpropil-, n-butil-, izobutil-, t-butil-, n-pentil- stb., de főleg metil-, etil-, n-propil-, izöpropil-, n-butil- és izobutil-25 gyököt jelent. A „rövidszénláncú alkoxi" és „halo-j(rövidszén!láncú)-alkil" kifejezések szintén 1—• 10 szénatomos csoportokat jelentenek. A cefalosporiu^nként ismert gombának vagy 30 ennek valamilyen mutánsának fermentációja során vegyületek keveréke keletkezik, amely főleg cefalosporin C-ből és kisebb mennyiségű (jelenleg penicillinként ismert) cefalosporin N-ből áll. A cefalosporin C savstabil, míg a cefalosporin N 35 nem. Ennek megfelelően a fermentlé és haloformiát reakciója előtt szükséges a keletkezett cefalosporin N „in situ" elbontása. Ezt pH 2-re való savanyítással végezzük, ásványi savat, pl. sósavat, kénsavat, foszforsavat vagy ezekhez hasonló 40 savat alkalmazva, majd 2—20 órán át inkubálva. A fermentlevet a savanyítás és inkubálás előtt vagy után egyaránt leszűrhetjük. Ezt követően a szűrt fermentlé pH-ját 7 és 9 45 közé, előnyösen kb. pH 8 értékre állítjuk be, valamilyen alkálifémbázist, pl. nátrium- vagy ká-Mumhidroxidot hozzáadva. A kezelt táptalaj mennyiségét kb. 25%-al hö-50 véljük aceton hozzáadásával. Ehhez az oldathoz adjuk keverés közben az acilezőszert, legalább 2, előnyösen 2—10 mól acilezőszer per mól cefalosporin C, legelőnyösebben 5—8 mól acilezőszer per mól cefalosporin C arányban (a fermentlé koö-55 centrációját előre meg kell határozni). A laSsü adagolás során, majd a hozzáadást követőleg legalább 30 percig a pH-t konstans értéken tartjuk. A táptalaj hőmérsékletét 4Ö°C alatt, előnyösen 0 és 15 °C között feel! Haxtani ezaJjaitt az idő alatt. 60 A reakció rendszerint a hozzáadás bevégzése után egy órával fejeződik be. Fele térfogatnyi, vízzel nem elegyedő oldószert adunk az elegyhez, előnyösen metilizobutilketont, ha az acilezőszer haloformiát, és n-buta-65 nolt, ha az acilezőszer izocianát, és a p>H~t 1—3, V.
