159093. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 6-amino-penicillánsav vizes oldatának aelőállítására
159093 11 12 A fenti, növesztett tenyészetet 9—10 liter, a következő összetételű táptalajba oltjuk át: „Nutrisoy" (szójaliszt) (Archer—Daniel—Midland Co. gyártmánya) 3,0% gyógyászati anyag 0,5% nátriumklorid 0,5% kalciumkarbonát 0,3% cerelóz 5,0% szacharóz 2,0% 4. példa 6-aminopenicillánsav 8%-os penicillin V-ből (3% benzhidrazid) Az 1. példában leírtak szerint 500 ml tenyészetből keletkezett mosott micéliumot 1 liter desztillált vízben felszuszpendálunk, A pH-4 7,8 és 8,2 értékek közé állítjuk. 80 g penicillin V-káliumot és 30 g benzhidrazidot adunk hozzá. A szuszpenziót keverés közben 40°C-on tartjuk. Szabályos időközönként mintákat veszünk és kromatográfiásan és analitikailag vizsgáljuk. A maximális 6-APA termelést, amely 75%j-os, körülbelül 4—6 óra alatt érjük el. A kísérletet megismételjük benzhidrazid hozzáadása nélkül. A 6-APA termelés kb. 5% és ez 12 óra után sem emelkedik. ÖHarniinoperáciillánsav penicillin V-ből, Stcreptömycés lavendufliae oldható amidázáit alkákriiazva, 1% benzhidrazid jelenlétében. Streptoinyoes lavendulae A.T.C.G. 13 664 tenyészetet alkalmazva, az orgatózmussal az 1. példában leírt eljárás szerint íeriméntációt hajtunk végre. A táptalaj 500 mlnéből szűréssel ei~ 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 A fermentáció 4—6 napig tart, majd a micéliumot leszűrjük vagy lecentrifugáljuk. A micéliumot mossuk, és ilyen alakban használjuk fel a penicillin 6-APA-vá történő enzimes hidrolíziséhez. 2. példa 6-aminopenicillánsav 2%-os penicillin G-ből (1% benzhidrazid) Az 1. példában leírtak szerint végrehajtott 600 ml-es fermentációból keletkezett micéíium mosott tömegét 1 liter desztillált vízben felszuszpendáljuk. A pH-t 7 értékre állítjuk be. 20 g penicillin V káliumot és 10 g benzhidrazidot adunk hozzá. A szuszpenzió hőmérsékletét 35 °C-ra emeljük, és a pH-t 7-re állítjuk be. Meghatározott időnként mintákat veszünk és kromatográfiásan megvizsgáljuk. A maximális termelés 2—-4 óra alatt keletkezik és ez az elméletinek min. 90%-a. 3. példa 6-aminopenicillánsav 2%-os penicillin V-ből (2% benzhidrazid) Az 1. példában leírtak szerint végrehajtott 500 ml-es fermentációban keletkezett micéíium mosott tömegét 1 liter desztillált vízben felszuszpendáljuk. A pH-értéket 8-ra állítjuk be, 20 g, az acilgyökön CM -gyel jelzett penicillin V-t és 20 g benzhidrazidot adunk hozzá. A szuszpenzió hőmérsékletét 35 °C-ra emeljük. Szabályos időközönként mintákat veszünk és kromatográfiásan vizsgáljuk. A maximális termelést, amely az elméletinek min. 90%na, kb. 3 óra alatt érjük el. A radioaktivitás nagy része a fenoxi-acetiil-benzhidrazidban található, míg a maradék d fenoxiecetsavban van. 5. példa 6-aminopenicillánsav penicillin G-ből (2%) benzhidrazid) Az 1. példában leírtak szerint 500 ml tenyészetből keletkezett mosott mieéliurnot 1 liter desztillált víziben feiszuszpendáluník. A pH-t 7-re állítjuk be, 20 g penicillin G-t ás 20 g benzhidrazidoit adunk hozzá. A 6-iAPA-tenmelés kb. 32,% és ez 2—>6 óra alatt érhető el. A fenoxi-^acetilbenzhidrazidot elválasztjuk és azonosítjuk. Ugyanez a kísértet, ha benzhidrazid nem volt jelen, 10%-os 6-APA-rtermelést ad. 6. példa 6-aminopenicilllánsiav penicillin V-ből, E. coli-t alkalmazva, 1%. benzhidrazid jelenlétében. 500 ml sűrű, 7,5 pH-értékű foszfátpuffer oldatban szuszpendálft Escherichia col sejtszuszpenziót nátriumkarbonát oldalttal pH = 8,5-re állítunk be. 1 mg% Üzozimiet, 0,05% nátrktmdezoxifcoilátat, 0,01 mól nátriumdtiliénddiamintetraacetátot ós 0,4%. tioluolt adunk hozzá, a szuszpenziót 2 órán. át 37 °C-on tartjuk, hogy a baktérdumsejteíket feltárjuk. Ezután a folyamatban a pH-étftéket ismét 7,5-re állítjuk sósavval és az ép sejteket és az egyéb oldhiatatíllan maradékot lecentrifugáljuk. A felül úszó folyékony exitraktoit desztillált vízzel 1 literre hígítjuk, melyhez 20 g penicillin V4ká.liuimot és 10 g benzhidrazidot adunk- A hőmérsékletet 37 °C-on tartjuk. A maximális 90!%^os 6-4APA-tienmelésit 1—2 óira alatt érjük el. A fenoxiacetal-bemzhidrazidot elválasztjuk és azonosítjuk. Ugyanez a reakció benzhidrazid nélkül hasonlóan min. 90% tenruelósit adott. A maximális 6^ÁPA4e,rimé!l(és azonban osak 6 óra múlva következett be. 7. példa S
