159067. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a W847-A antibiotikum és származékai előállítására
9 159067 10 hatásosnak bizonyult szubkután alkalmazva egéren S. aureus (Gray) ; ellen 20 mg/kg PD 50 értékkel (PDr,o= védőadag a vizsgált populáció 50%-ára) és P. aeruginosa ellen 161 mg/kg PDSQ értékkel. Az LDr>0 (letalis adag a vizsgált populáció 50o,o-ára) egéren szubkután alkalmazva 7000 mg/kg. A W847-A antibiotikum felhasználható laboratóriumi üvegeszközök, sebészeti eszközök és hasonlók tisztítására és sterilizálására. Azonkívül kombinálható szappannal és deitergensekk el élelmiszerek készítésére használt felületek vagy helyiségek, például konyhák, ebédlők stb., tisztítására és fertőtlenítésére is. Anélkül, hogy a következő fejtegetésekkel korlátozni kívánnánk a találmány szerinti átalakítási eljárás alkalmazhatóságát, úgy tűnik, hogy meglepően szelektív elszappanosítási reakciók mennek végbe. Nevezetesen úgy látszik, hogy a W847 antibiotikum egy laktongyűrűt és legalább négy észterifikálható csoportot tartalmaz. A W847—A antibiotikumban ez a négy hidroxilcsoport, úgy látszik, nincs észterifikálva. A W847—B, W847—Ci és W847—C2 antibiotikum frakciók feltehetően a W847—A antibiotikum monoacetát, diacetát és monoacetát-monopropionát észterei. A találmány szerinti eljárás szelektív hidrolízise — lépése körülményei között ezek az észterek á szabad hidroxilokká hidrclizálódnak anélkül, hogy felnyílna a laktongyűrű vagy megváltozna vagy átrendeződne az antibotikum molekula szerkezete. Ez meglepő, mert ilyen körülmények között várható lenne a laktongyűrű felnyílása. Jelentős bomlás és így a kívánt termék hozamának csökkenése következik be, ha a hidrolízist savas körülmények között vagy 12-nél nagyobb pH értéken végezzük. Kb. 7 és kb. 9 pH között a hidrolízis túlságosan lassú a gyakorlati alkalmazásra. Ezt az is bizonyítja, hogy a 715 638 számú belga szabadalom szerinti eljárásban a fermentációs keverék pH-ja ebben a tartományban van, és mégis több napos fermentáció után csak kis mennyiségű (10%-nál kevesebb) W847—A van a fermentleben. Mint fentebb említettük, előnyösen alkalmazható a 715 638 számú belga szabadalmi leírás szertitnti eljairás fsrtaentlevé közvetlen hidrolízisre. Egyéb előnyei mellett ez az eljiárás lehetővé teszi a W847—A antibiotikumnak a fermentléből való kinyerését a lé kb. Vs-ét kitevő térfogatú metilénkloriddal vagy hasonló oldószerrel. Ha viszont a W847 komplex antibiotikumot előbb elkülönítik a f er mentléből, az oldószerből a fermentlé kb. kétszeres térfogatára van szükség. A fermentlé megszűrhető a találmány szerinti hidrolízis végrehajtása előtt vagy után. Szűrés előtt általában szűrést elősegítő anyagot, például celitet vagy Supercelt adunk hozzá. A fermentlének a fent leírt előnyös közvetlen hidrolízise után a szűrt fermentlevet kívánatos vízzel nem elegyedő poláris szerves oldószerrel, például metilénkloriddal extrahálni, és a kivonatot koncentrálni. Ha a szelektív hidrolízist nem a teljes fermentlével végezzük, előnyös, ha az oldószerrendszer vízzel elegyedő poláris, szerves összetevőt tartalmaz a W847 antibiotikum komponense oldhatóságának növelésére és ezzel a hidrolízis ütemének fokozására. Ilyen alkalmas komponens például a metanol. Más vízzel elegyedő szerves oldószerek az etanol, izopropanol, aceton és dimetilacetamid. A poláris komponensnek természetesen nem szabad hidrolizálódnia az adott reakciókörülmények között. Hidrolízis után a közeget célszerű bepárolni és/vagy extrahálni, majd a W847—A-t a koncentrátümokbcl kikristályosítani. A fent leírt bármelyik megvalósítási mód esetén a kristályosítás elősegíthető a W847—A antibiotikumot korlátozottan oldó oldószer, például aceton, hozzáadásával. A közeget meglúgosító alkalmas anyagok például az ammónia, nátriumhidroxid, káliumhidroxid, kalciumhidroxid, nátriumkarbonát, nátriumhidrogénkarbonát stb. A hozzáadott menynyiség előnyösen annyi, amennyi szükséges a 9—12 pH érték beállítására. A hidrolízis üteme fokozható, ha magasabb hőmérsékleten dolgozunk. Magasabb hőmérsékletek használata azonban nem ajánlatos, ha fermentlevet közvetlenül hidrolizálunk, vagy ha ammóniát használunk a közeg meglúgosítására. A hidrolízis kívánatos teljessége többféleképpen állapítható meg. Egyik előnyös művelet a vékonyréteges kromatograf álás; ez abban áll, hogy a reakciókeverékből 10 ml alikvot mintát veszünk, és pH-ját szükség esetén kénsavval 9,0—9,5-re állítjuk be. Ezután az alikvotot 15 ml etilacetáttal extraháljuk, és a kivonatot csökkentett nyomás alatt szárazra pároljuk. Ezután a maradékot feloldjuk 0,2 ml 95%-os etanolban, és ebből az oldatból 20 //l-t ráviszünk vékonyréteges kovasavgél GF lemezekre, 4:6 arányú metanol-kloroform elegyet használva oldószerrendszarként. Hasonító mennyiségű hiteles W847—A antibiotikum-mintát viszünk fel a vékony rétegre. 15—30 perc elmúltával a lemezeket megpermetezzük tömény kénsav és metanol 1:1 térfogatarányú elegy ével, és néhány percre 105 C°ra hevítve — előhívjuk. Ezután összehasonlítjuk a két folt helyzetét és színét. Az 1. példában ismertetjük a W847 komplex antibiotikum fermentációs előállítását, és a 2. és 3. példában a komplex extrahálását a fermentléből. Ezek az eljárások le vannak írva az említett 715 638 számú belga szabadalmi leírásban. A további példák a találmány szerinti eljárás alkalmazását ismertetik a 715 638 belga szabadalom szerinti eljárással készült fermentiere (4. példa), az elkülönített W847 komplexra (5. pél-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
