158957. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirrolidinkarboxamido-D-galakto-oktopiranozid-tipusú antibiotikumok (linkomicin, celeszticetin) 3-foszfátésztereinek
158957 19 Az r-demetil-kliniimicin-3-foszfát szerkezetet a csatolt rajz (III) képlete ábrázolja, ebben OH P = -P li\ O OH 4. példa: 10 20 6. példa: Az 1. példában leírt mikroorganizmus-törzszsel és táptalajjal, valamint az ott leírt módszerrel dolgozunk, a fermentációs közeghez azonban linkomicin helyett 50 y/ml l'-demetiljr^étil-linkomiicint adunk. Egyebekben az 1. példa szerint folytatjuk le a fermentációt és a kapott termék elkülönítését; ily módon r-demetil-r-etil-lmkomicin-3-Jfoszfätot kapunk. l'-demetil-4'-depropil-4'-pentil-klimmicin-3--foszfát A 2. példában leírt módon, de klinimicin helyett 50 y/ml l'^demötil^4'-.depro;p'il^4'-jpe:ntil-kláinimSicin hozzáadásával kapott k)b. 12 liter fer>mentációs levet diátómaiföld segítségével leszűrünk. A kapott szűrőlepényt 1 liter vízzel mossuk. A mosófolyadékot és a tiszta fertmentlevet egyesítjük és az egyesített tiszta fermentlé-mosófolyadék elegyet kromatografáló oszlopon kromatografálguk. Az oszlop töltete acetátformában levő Dowex—1 (X—4). Az előbbiek során a 3. példáiban leírt kromatográfiás eljárásit követjük. Az összegyűjtött frakciókat alkalikus foszfatázzal végzett kezelés előtt és után S. lutea elleni aktivitásukra nézve megvizsgáljuk. A 2—7. eluátumot egyesítjük és az oldatot fagyasztva szárítjuk. Így 18,63 g fagyasztva szárított 1 '-demetiW-depropil^'Hpentil-klinimicin-3-foszfátot kapunk. Ezt az anyagot úgy tisztítjuk, hogy ellen-áramú megosztásnak vetjük alá a 3. példában leírt módon. 500 átvitel után bizonyos kiválasztott csövek tartalmát S. lutea elleni aktivitásra nézve megvizsgáljuk, alkalikus foszfatázzal végzett kezelés előtt és után egyaránt. A 380—4)00. csőiből származó frakciókait összeöritjük, vizes oldattá betöményítjük, melyet azután fagyasztva szárítunk. így l'-dem.etn^'-deproipil^'-pentil-klinimiicin-S-föszífátot kapunk. Az 1 '-demetil-4'-deprqpil-4'-pentil-kliinimicin-3-foszfát szerkezetét a csatolt rajz IV képlete OH /' ábrázolja, ahol P = —P O OH 5. példa: v Az .1. példában leírt mikroorganizmus-törzszsel és táptalajjal, valamint az ott leírt módszerrel dolgozunk, a (fermentációs közeghez azonban linkomicin helyett 50 y/ml 4'Hdepropil-4'^etil-linkomicint adunk. Egyebekben az 1. példa szerint folytatjuk le a fermentációt és a kapott termék elkülönítését; ily módon 4'-jdepropi, l-4'-étil-linkomicin'-3-ifoszfátoit kapunk. 7. példa: 15 Az 1. példában leírt mikroorganizmus-törzszsel és táptalajjal, valamint az ott leírt módszerrel dolgozunk, a fermentációs közeghez azonban linkomiicin helyett 50 y/ml r-demetil-linkomicint adunk. Egyebekben az 1. példa sze-20 rint folytatjuk le a fermentációt és a kapott termék elkülönítését; ily módon l'-demetil-,Mnko:micint kapunk. 25 8. példa: A 2. példában leírt mikroorganizmus-törzszsel és táptalajjal, valamint az ott leírt módszerrel dolgozunk, a fermentációs közeghez azonlban klinimicin helyett 50 y/ml celeszticetimt adunk. Egyebekben a 2. példa szerint folytatjuk le a fermentációt és a kapott termék elkülönítését; ily módon celeszticetin-:3-fosztfátot kapunk. 30 35 40 45 50 55 60 65 9. példa: Az 1—8. példáiban leírt nem foszforilezett vegyületeket külön-külön inkubáljuk módosított Czapek—Dox-taptalajon tenyésztett Streptamyces-kultúra sejtmentes extráktumával. A sejtekét ultrahanggal roncsoljuk el 4 percig tartó kezeléssel 0,04 mólos föszfát-pufferben (pH — = 7,5)., vagy 0,íl mólos glicü-glidn-pufferben (pH = >8,,0), vagy pedig biológiai roncsolást végzünk tajásfehérjeJlizo2immel 1 órán át 28 C°on. A módosított Czapek—Dox-taptalaj összetétele a következő: NaiNOj, 1J5 g/l (ÍNH4 ) 2 S0 4 1,5 gffll CaCOg 5,0 g/l K2 HP0 3 .1,0 g/l MgS04 0,5 g/l KCl 0,5 g/l FeS04 -7H 2 O 0,01 g/l Glükóz-imoinohidrát 20,0 g/l „Difeo" élesztő kivonat 2,5 g/l NZ-amin B 5,0 g/l 1 liter vízben; az autoklávban történő kezelés előtt pH = 7,12, autokláviban végzett kezelés után pH = 7,2 10
