158957. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirrolidinkarboxamido-D-galakto-oktopiranozid-tipusú antibiotikumok (linkomicin, celeszticetin) 3-foszfátésztereinek
158957 17 18 az előbbiekben leírt módon S. lutea elleni aktivitásra nézve megvizsgálunk alkalikus foszfatázzial való kezelés előtt és után. A 200—300. frakciót egyesítjük. Az oldatot vákuumban szárazra pároljuk, ma:jd a maradékot feloldjuk 5 ml metanolban. Ezt az oldatot acetonnal, éterrel és 1 ml n metanolos liidrogánikloriddal keverjük. A kapott — klinimicin-3-foszifátfoól álló — csapadékot szűréssel elkülönítjük és szárítjuk, a kitermelés 300 mg. Ennek a klinimiein-3-foszfát terméknek jellemzői: Infravörös spektrum Az ásványolajban szuszpendált klinimicin-3-ifoszfát infravörös abszorpciós spektruma a következő hullámhosszaiknál (reciprok centiméterben kifejezve) mutat csúcsokat: 3300 (S) 1575 (S) (sh) 1058 (S) 3055 (S) 1570 (S) (sh) 1220 (ÍS) 3940 (S) (olaj) 1555 (S) 1148 (S) 2845 ,(S) ,(otaj) 1532 (S) 1,098 (S) 2700 (S) 15120 (S) ,(sh) 107,0 (S) 2680 (S) 1505 <S) (sh) 1040 (S) 17;1'8 (S) (sh) 1470 ;(S) i(sh) 987 (S) 1705 (S) (sh) 1458 i(S) (olaj) 960 (S) 1700 (S) (sh) 1435 <S) (sh) 88i0 (M) 1685 (S) .11305 i(S) i(sih) 855 (M) 1675 (S) 1375 <S) (olaj) 81.5 (M) 1652 (S) .(sh) 1365 (S) i(sh) 780 <(M) 1,625 i(S) (sh) 1I3I10 (S) 720 (M) A káliumbromiddal tafolettázott kliniroicin^3Hfoszfát infravörös spektruma a következő hulláimhosszaknál ((reciprok centiméteriben kifejezve) mutat csúcsokat : 3430 (S) 1560 <M) 1073 (S)-3230 (S) 1,540 (W) 1045 (M) 3070 (S) 1455 (W) 989 (W) 2060 (S) 1384 (M) 930 (W) 2930 (S) 1315 (W) 880 (W) 2870 (iS) 1255 (M) 855 (W) 1685 (S) 1220 (M) 780 (W) 1)680 (S) 11160 (M) 1635 (M) 1095 (S) A fenti infravörös spektrumokban a sávok erősségét az „S", „M" és „W" betűk jelzik megközelítőién a sáv szomszédságéban észlelt alapértékhez képest. Így az „S" jelű sáv megfelel a spektrum legerősebb sávjának, az „M" jelű sávok erőssége a legerősebb sáv 1/3—2/3-ánafc felel meg, míg a „W" jelű sávok, intenzitása gyengébb, mint a legerősebb sávok 1/3-a. Ezeket a számításokat egy százalékos lépték segítségével végeztük. 10 15 25 35 40 50 55 60 A fclindimi:CÍn-3-fo8zfát baktériumellenes aktivitása in vivo; CD50 = 15 (H0-—23) mg/kg (szuibkután alkalmazás, Staphylococcus aureus-szal fertőzött egereknél)., ' A kllinimicin-3-ifosizfát in vitro inaktív egészen 1000 yf\a\l koncentrációig a következő mikroorganizimusdkkiall szemben: B. sulbtiiis S. aureus M. avium K. pneumoniae E. coli S. sehottaiuelleri Proteus vulgaris M. R. S. lutea S. pastorianus 2o. 3. példa: r-D,emetilfclini'micinH3-'fosz!fiát Fermentációs levett (kb. 12 lilter), melyet a 2. példában leírt fermentációval úgy kaptunk, hogy l'-deimetil-iklinimicint adtunk a táptalajhoz 50 y/ml mennyiségiben, szűrési segédanyagként diatómaíföldet alkaölmaava szűrünk. A kapott szűrőlepéhyt 1 liter vízzel mossuk. A mosó-30 folyadékot és a tiszta fermetttlevet egyesítjük és az egyesített tiszta fermentlé-mosöfolyadék elegyet kromatograifáló oszlopom kroniatografáljuk. Az oszlop töltete acetát-formában levő Dowex—1 (X—4), A fent leírt tiszta fermentlémosótfolyadék elegy pH-^ját vizies ammóniumhidroxid oldattal 10,0 értékre beállítjuk, és ezt az oldaitot átvezetjük az oszlopon. Az eltávozó folyadékot három frakcióban fogjuk fel, ezek térfogata egyenként 4 liter és jelük: Spent—1, Spent—2 és Spent—3. Az oszlopot ezután 4, liter vízzel mossuk és ezt 2X2 ,literes frakciókba gyűjitjükj melyek jele „Mosóvíz—1" és „Mosóvíz—i2". Az oszlopot ezután 5%K& vizes ecetsav oldattal eluáljuk. Hét, egyenként 1 literes 45 frakciót gyűjtünk, és ezeket rendre „Eluátum. 1" — „Eluátuim 7'%nek nevezzük. Valamennyi frakciót alkalikus foszifatázzal történő kezelés előtt és után S. lutea elleni aktivitásra nézve megvizsgáljjuk. Ezután az „Eluátum 2" — Eluátum 7" jelű frakciókat egyesítjük és az oldatot fagyasztva szárítjuk. így 16,98 g fagyasztva szárított készítményt kapunk, amely l'-demetil-klinimicin^3-ifoszfátot tartalmaz. Ezt az anyagot ellenáramú megoszlatásnak vetjük alá, oldószer-rendszerként n-butanol-víz (1 :1 v/v) elegyet használunk. Az ellenáramú megoszlatásra szolgáló berendezés térfogata 10 ml/fázis. 500 átvitel után bizonyos kiválasztott csövek tartalmáit S. lutea elleni aktivitásukra nézve megvizsgáljuk, alkalikus foszfatázzal történő kezelés előtt és után egyaránt. A 220—(260. csövekben levő frakciókat össze-öntjük, betöményítjük, és vizes oldatot fagyasztva szárítjuk. így . 370 mg l'-demetil^klini!miiCin^3-tfos2afá.tot ka-65 punk. 9
