158957. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirrolidinkarboxamido-D-galakto-oktopiranozid-tipusú antibiotikumok (linkomicin, celeszticetin) 3-foszfátésztereinek
15 158957 16 ben felszuszpenidálunk, az iszapot beömtjük egy 5 cm átmérőjű (2") üvegoszlopba és hagyjuk az iszapot atmoszférikus nyomáson leülepedni. A fentiekben leírt tiszta fermentlé-4mosóvíz elegyet átvezetjük az oszlopon. A kihasznált levet egy frakcióiként gyűjtjük és ezít A-nak nevezzük. Az oszlopot ezután vízzel mossuk. A mosóvizet összegyűjtjük és ezt B frakciónak nevezzük. Az oszlopot ezután 5 liter 60%-os vizes metanollal elulálljuk. Összesen 200 firiakiciót gyűjtünk. Az oszlepQ't ezt követően 2 liter 95%-os metanollal eluáljuk. Ezt az eluátumot egyetlen frakcióként fogjuk fel. Valamennyi összegyűjtött frakciót, a klimmicin^SHÍoszifát jelenlétének magihátáríozíásia céljaiból, alkalikus foszfatázzál végzett kezelés előtt" és után megyiizsgáljuk a S. lutea mikroorgianiamußslal szamlben tanúsított aktivitásra nézve. Ezen kísérletek eredményeit az alábbiakban isimertetijük: oszlopot acetát-formában levő Dowiex—1 (X—4) gyantáival (Dow Ohamiöal Co. oég, Midiland, Michigan) töltjük meg. A fentiekben leírt módon az adszorfoiensoszloprál kapott 4 liter C 5 oldatot vizes ammóniomhídiroxid-oildattal pH = = 10,0 értékre beállítjuk, és az ailkáMfcus oldatot átvezetjük a kromatográfiás oszlopon. Az elfolyó folyadékot 1 literes frakcióik formaijaiban gyűjtjük össze, .(4X1 liter), ezeket sorra 10 Spent—d, Spent—;2, Spent—3 és Spent—4^névvél jelöljük. Az oszlopot ezután 2 liter vízzel mossuk és ezt ,,Mosóvíz"-nék nevezzük, végül az oszlopot 5%-os vizes ecíetsiaiwial eluálljuk. 20 ml^es frakciókat szedünk. Bizonyos, kiválasztott 15 frakciókat alkalikus foszfatázzál végzett kezelés előtt és után megvizsgáljuk S. lutea elleni afctivitásna nézve. Az eredményekét az aláibbiíakiban adjuk meg: 20 Zóna nagysága Zóna nagysága mim -ben Zóna nagysága Kontroll Alkalikus mim -iDtai foszfafoszfaKontroll Alkalikus A frakció jele vagy tázzal tázzal foszfafoszfa25 elnevezése végzett végzett A frakció jele vagy tázzal tázzal kezelés kezelés elnevezése végzett kezelés végzett kezelés előtt után végzett kezelés végzett kezelés előtt után 30 Kiindulási an vas (C oldat) 23 43 Spent-,1 20,5 21 Tiszta feirmentléHmosóvíz Spent-2 21 22 komlbiináció 26 36 Spent--3 21,5 21,5 Kihasznált fermentlé Spent-4 20,5 23 (A frakció) 0 0 35 „Mosóyíz" 16 16 Mosóvíz (B frakció) 0 28 5%-os ecetsav 60%-os vizes Frakció száma metanolos frakciók 20 15 15 5 19 30 25 25 82 10 Ö 27 40 30 29 51 15 0 22 35 26 50 20 0 22 40 215 47,5 25 18,5 23 45 19 42,5 30 20 41 50 18 39 35 22 42 45 60 16 31 40 23 46 70 16 26 45 26 47 80 16 22 50 25 46 90 16 20 60 25 45 100 16 17 70 23 44 50 120 16 17 80 23 44 140 16 17 90 22 44 160 16 16 100 21 43 180 16 18 1120 20 43 200 16 16 140 18 41 55 160 18 38 Az oszlopnak 5%-os vizes ecetsavival történő 180 Ii7 38 eluálásávál kapott 22—70 frakciót egyesítjük 200 18 37 és az oldatot fagyasztva szárítvia 2,59 g anya-95%-os vizes-tmetanol 37 41 got ka pur ük, melyet D-nek jelöljünk . Ebiből a Az oszlopnak 6iOl0 /o-os vizes metanollal végzett eluálásánál kapott 25—200. frakciót egyesítjük és ezt az oldatot (kb. 4 liter) C-nek nevezzük. Ezt az anyagot azután egy anioncserélő kromatográfiás oszlopon kromatográfiaijuk. Az g0 készítményből 2 g-ot ellenáramú megosztásnak vetünk álá, oldószenrendszarként n-butlaniol-víz (1 : 1 v/v) elegyet használunk. Az ellenáriamú megosztásra szolgáló berendezés térfogata 10 ml/lfázis és a megosztás 500 átvitelnek felel -meg. 65 500 átvitel után bizonyos kiivalasiztott csöveket 8
