158949. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorgátlő hatású, bázikus növényi fehérjék előállítására

3 158949 4 1. táblázat Fehérje v. fehérjekonc. Állati tumor Dózis •mg/kig/'nap Kezelési mód Hatás gátlás (—) ill. serkentés (+) Lizingazdag hiszton konc. PD 55611 Yoshida SO p. o. —73 Lizinigazdag i hilszton (tiszta) PD 516 frakció Yoshida 10 p. o. —63 Arginingazdaig hiszton konc. Yoshida 50 p. o. +42 Protaminfrakció Yoshida 40 p. o. +30 E négy aminosavval más kísérleteikben végzett vizsgálataink arra utaltak, hogy ezen aminosavak optikai aszimmetriája és a daganatnövekedés ül. dagänatanyagesere között kapcsolatok vannak, amäre utalnak azok az eredményeink is, amelyet átoltható állati tumorokon aminosavak antipódrjaival nyertünk. (2. táblázat). 2. táblázat Aminosav Állati tumor Dózis mg/kg/nap Kezelési mód Hatás gátlás;(—) •ill. serkentés (+) DL-aszparaginsav Yoshida 800 p. o. 0 L-aszparaginsav Yoshida .2100 p. o. +15 D-aszp araginsav Yoshida 1000 p. o. —80 •DL-glutaminsav Ehrlich 1000 i.p. 0 L^glutatminsav Ehrlich 1000 i. p.. —75 D-glutaminsav Ehrlich 1Ö00 i.p. +20 DL-arginin L^arginin Yoshida Yoshida 1500 5)00 i.p. i. p. 0 +40 D-arginin Yoshida soo p. o. —i5IO L-Oázin Yoshida 1000 p. o. —50 Az átoltásokat, kezeléseket, és az eredmények kiértékelését a szakirodalomban ismertetett, szokásos módon végeztük. Különösen figyelemreméltó az L-glutaminsav és L-lizin daganatgátló hatása, amely aminosavak D-formáját Kögl, F. et al [Z. physiol. Chem. 258,57 (1939); Experdentia 5437 (1949)] állati és emlberi daganatok fehérjehidrolizátumából izolálták, bár az eredményeket később kétségbe vonták (Wartburg, O.—H. Christian, Naturwiss. 48/49, 731 (1942)], máig sem bizonyított 5 az abnormiális fehérjék szerepe a daganatok kifejlődésében. Az L-aszparaginsav és L-argindn daganatseríkentő hatásia különös szerepüket bizonyítja a daiganatnövékedésben, mint az L-arginázzal és L-aszparagánázzal észlelt jelentős 10 daganatgátló hatás megerősít. (Biochem. Biophys. Acta 11.396 (Ili9l53); Broome, D. J. J. Exp. Med. 118, 1, 99 (1963); Roberts. J. et. al. Cancer Res. 26, 2213 (1966); Schwartz. J. H. et al., Proc: Niat. Acad. Sei. 5)6, 5, 15(16 (1966)]. 15 A két táblázat összehasonlítása azt a meglepő eredményt mutatja, hogy ha figyelembe is vesszük a vizsgált aminosavak optikai izomerjeinek hatását az általunk izolált fehér-20 jék esetére is, akkor sem magyarázzák meg az izolált bázikus fehérjék két nagyságrenddel nagyobb daganiatgáöó hatását. Ennek alapján feltételezzük, hogy az eljárás szerint izolált fehérjékben új, peptkMsötésIben eddig ki nem 25 mutatott aminosavak ill. származékok vannak jelen. Ezt a feltételezésünket a fehérje hidrolizátumok aminosavainak rétegkromiatikus vizsgálatakor jelentkező új, bázikus jellegű aminosav-foltok jelentkezése alátámasztja. 30 A találmány tumorgátló hatású, bázikus növényi fehérjék előállítására való eljárásra vonatkozik, növényi levek vagy extraktumok felhasználásával, ezek frakcionálásával és a „K hatásos frakciók tisztításával, amely eljárásnak jellemzője, hogy a kezelendő növényi levet savval pH 1—3,5 közötti értékre állítjuk, a feiülúszót a csapadéktól elválasztjuk és az oldat , pH-ját lúgoldattal lépcsőzetesen pH 8-wál lú-40 gosabbra állítjuk

be és a pH 8-tól 11,5-ig terjedő tartományban levált egyes frakciókat biológiai úton osztályozzuk és a daganátgátló frakciókat közvetlenül vagy további tisztítás, célszerűen oszlopkromatográfiás vagy többszöri lecsapásos úton való tisztítás után felhasználjuk. Az eljárás egyik előnyös kiviteli módjánál kiindulási anyagként a répa-félék (Beta-genus) fajait, ill. ennek növényi nedveit vagy extráktumait használhatjuk kiinduló anyagként, különösen jó eredményeket értünk el cékla-fajták (Beta-vulg. var. conditiva) feldolgozásával. A találmány szerinti eljárás kivitelezéséhez a savas, ill. lúgos közeg-beállítást tetszőleges sav, ill. bázis felhasználásával végezhetjük, de célszerűnek bizonyul ásványi savak és lúgok felhasználása, elsősorban sósav és nátronlúg alkalmazása. A lúgos kies apással nyert termékeket akár oszlopkromatográfiával, akár szerves oldószerből való kiicsapással végezhetjük. Különösen előnyös az oszlopkromatográfiai tisztításnál cellulózé vagy műanyag alapanyagú szorben-65 sek vagy térhálósított dextringél készítmények 2