158949. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorgátlő hatású, bázikus növényi fehérjék előállítására

5 158949 6 alkalmazása. Az eluálásra különiböző pH-jú foszfátpuffereket vagy különböző mólaritású savat is felhasználhatunk. A lépcsőzetes lecsapásnál elsődlegesen levált termék tisztítását azonban jó eredménnyel végezhetjük, például triklórecetsav, aceton, vagy alkoholos kicsapással is. A találmány szerinti eljárással előállított bázifcus növényi fehérjék olcsó alapanyagból, egyszerű technológiai eljárással állíthatók elő és igen előnyös tulajdonságuk az is, hogy orális adagolásra is alkalmasak. A találmány szerinti eljárás részleteit a következő kiviteli példák alapján ismertetjük: 1. pélida: 70 kg Penfected Detroit cékla-fajta répatestét a levélzet meghagyása mellett lucernapépesítő berendezésiben pépesítettük és a levet szőlészeti faprésen, vászonzacskaban kipréseltük, majd a törkölyt még egyszer 20 liter vízzel pépesítettük és félórai keverés után ismét préseltük. A présleveket összeöntöttük és összesen 56,30 kg présleivet nyertünk. Az oldathoz kgként 2 ml hígított sósavat (1180 ml ccHCl -r + 800 ml deszt. víz) adagoltunk, miáltal a pR-t 3,!5^re állítottuk be. A lewáít csapadékot dekantáltuk, majd centrifugáltuk és a felülúszó oldat kg-jához a pH 9,1 (beállítására 33,5 ml hígított, 5%-os NaOH oldatot adtunk. A leváló csapadékot dekantáltuk, majd centrifugáltuk és a felülúszó folyadékot; lépcsősen tovább lúgosítottuk. Az egyes lépésekben nyert csapadékokat mennyiségileg és minőségileg a 3. táblázatban foglaltuk össze. 3. táblázat Nyersfehérü jében jelentej kező kom- Tumor§ ponensek Eluens gátló g száma (elektfrakciók •rj ^ rofor, kamé» £ «M nyítőgél) 9,1 332 7 foszfátpuiffer pH 7,0 9,4 11)0 4 foszfátpuffer pH 7,0 9,7 80 3 foszfátpuiffer pH 7,0 10,0 1016 2 ifoszfátpufjfer pH 7,0 10,15 172 4 foszfátpuffer pH 7,0 11,0 100 3 foszfátpuffer pH 7,10 11,5 200 3 foszfátpuffer pH 7,0 A csapadékokat egyenként desztillált vízben szuszpendáltuk, majd liofilizáltuk. Az egyes frakciókból 10—10 g lioifíliizétumport 7,0 p-H-jú foszfátpuffiferlben oldottunk, • majd 4,5x108 5 cm méretű üvegaszlopban, 7-es pH-jú foszfátpufferben szuszpendált DEAE-cellulózepoiron 7,0 pH-jú foszfátpufiferrel eluáltuk és 50 ml-es frakciókat szedtünk. A pH 9,1 frakció 10 g-jáiból 0,5 g tumor-10 gátló fehérjét nyertünk. 2. példa: 15 Ugyanúgy járunk el, mint az 1. példánál a lúgos frakciók leválasztásáig. A frakciókat egyenként 200 ml vízben szuszpendálva 1:1 arányiban 90%-os etanollal kezeltük, a kicsapódott fehérjét összegyűjtve 24 órán át dia-20 lizáltuk és utána liofilizáltuk. A termék keményítőgél-elektroforetikus vizsgálata 2 lizin-gazdag hiszton jelenlété mutatta. Kitermelés 1,5 g Mofilizatum. . Az, előállított fehérjék mol. súlya Sephadex-25 gélen végzett réteglkramatográfiás vizsgálat szerint 12—íl700iO-<iig változott. A fehérjék sósavas hdidrolizátumáinak kvalitatív és félkvantitatív vizsgálata, valamint összehasonlítása hasonló típusú állati fehérjék hidrolizátuimával (Sigma 30 Co., USA) azt mutatták, hogy az izolált fehérjék aiminiosavösszetétele közel azonos az állati bázákus fehérjék aminosav-összetéltelével. Az általunk izolált növényi bázákus fehérjékben és a kereskedelmi állati bázákus fehér-35 jékben, ill. sósavas Mdrolizátuimaikiban rétegkromatográfiásan eddig nem ismert ammosaivszárimazékokat tudtunk kimutatni, még pedig az arginin-gazdag hásztanoklban elsősorbari lizin-típusú anyagokat, de mellette arginin-tí-40 pusú anyagokat is, a lizdn^gazdag hisztonoklban pedig elsősorban arginin-típus anyagokat, de egyúttal lizin-Mpusúákat is. 45 3. példa: 50 kg lucerna (Meriieago sativa) földfeletti részét lucemapépesítő berendezésen pépesítettük és a levet szőlészeti faprésen vászonzacs-50 kóban kipréseltük, majd a törkölylt még kétszer 15—15 liter vízzel pépesítettük és fél-órai kezelés után ismét préseltük. A ptrésleveket összeöntöttük és összesen 615 kg préslevet nyertünk. Az oldathoz 10%-os sósav oldatot ada-55 goltunk, míg az oldat pH^ja 1,0 lett. A levált csapadékot dekantáltuk, majd centrifugáltuk és a felülúszó oldat pH-ját 9,1-ire állítottuk be, 5%-os NaQH-oldat adagolásáwal. A leváló csa. padékot dekantáltuk, majd centrifugáltuk és „_ az így nyert csapadékot liofilizáltuk. Így összesen 75 kg nyers bázákus fehérjét kaptunk. A kapott bázikius fehérjét az 1. példában megadott módon tisztítottuk. Az első frakcióik analitikai vizsgálata lizin-gazdag íbázikus fehérjéket 65 mutatott, amelyek — továbbá az 1. példa sze-3