158918. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kortikoszteroidok mikrobiológiai C-1,2-dehidrogénezése hatásfokának javítására
188918 5 8 hozzuk össze. Ekkor az eniziim képződése percek alatit .megindul és mennyisége a sejtekben néL hány ára alatt elér egy maximális értéket. A sztieroid-l,2-dehidrogená2 enzim indukciójára az asn,drosatáta- és pinaginán-sor töbib tialgja •— pl. az r,»nüroszténdion, tesztoszteron, progeszteron, hidrokortizpn, predinizolon — képes. Az idézett szabadalmi leírások szerinti, Oorynebactertomot alkalmazó eljárások esetében a 'mikroorganizmus efezaporítása után magát az átalakítandó szteroidot 'adagolják ia tenyészethez. Az enzim kialakulása a tulajdonképpeni szteroid-átalakítással párhuzamosan az átalakítandó szteroid, mint induktor hatására ím egy végbe (vö. fentieken kívül a 3 091 575 sz. amerikai szabadalmi leírás). Az átalakítás így lassan indul 'meg, fokozatosan az enziimfcépeődés arányában gyorsul és több óra után éri el maximális sebességét. Jelentős lépéssel visz előbbre ezekhez képest egy oly eljárás {149 062 sz. magyar szabadalmi leírás), amely szerint & Ootrynöbaoterium tenyészetet előbb kisebb .mennyiségű szteroiddal indukálják és csak az. enzimet .már (tartalmazó, aktív tenyészettel kezdik meg hidrokoirtizon 0,4—0,'8 mg/ml koncentrációban történő átalakítását. Ez növeli az eljárás biztonságát, sőt lehetővé teszi, hogy az átalakítandó hidrokortizont ne tömény tenyészethez, hanem 1:10—1:20 arányban hígított tenyészethez adagolják. Az indukált tenyészet hígítva is elegendő C~l,2-dshidrogená.zt tartalmaz, ugyanakkor a hígítás egyszerű és eredményes módja a sziteroidlebonitó hatás, kiküszöbölésének és ezzel a kitermelés emelésének. A gazdaságosság javítására irányuló fenti szabadalmiak egyike sem foglalkozik azzal a kérdéssel, hogy az eljárásokkal elérhető kitermelés milyen 'minőségű termékre vonatkozik. A nig-os adagokban alkalmazott isziteroid-vegyületeknél rendkívül fonitos követelmény \az idegien, szteroidoktól váló mentesség. Huzamos adagolás esetén ugyanis egy eltérő farmakológiai 'hatású szteroidivagyület néhány %-nyi mennyiségben is veszélyes (mellékhatásokat okozhat, azonos indukációs terülietű, de különböző mennyis ég sitiben adagolandó szteroid vegyületek együttes jelenléte pedig kizárja a pontos adagolás lehetőségét. Az általános nemzetközi 'gyakorlat azért valamennyi szteroid vegyület klinikai íélhasználásánál megszabja a megengedhető .maxámális idegen szteroid tartalmat. C-l,,2-dehidrogénezett termékek .esetébein az idegen szteroidok fogalma alá tartozik az l,2-helyze:titaen telített (megfelelő vegyület, tehát az átalakítás kündulóanyaga is, amelynek a dehidrogériiezett termékekben jelenlevő 'mennyisége legfeljebb 2% lehet. Ha a mikrobiológiai átalakítás nem megy téliesen végibe, hanem átalakulalüian kiindulási anyag jelentős mennyiségben marad az. átalakítás 'befejeztével a kívánt itermék mellett, akkor a kémiai feldolgozás során a két .vegyület közel azonos, szerkezetük miatt csak rendkívül nehezen válaslZitiható el egymástól, lézert a termék kiindulóanyaggal való szennyezettségének kérdésé gyakorlatilag már a mikrobiológiai fázisban dől el. Az idézett eljárások ebből a szomipontíból általéfojam eaak azt biztosítják, hogy iaz átalakulás 90% felett van; különösen érvényes fez az egyébként kiemelkedő gazdaságosságot mutató növelt (10—40 nig/ml) koncentrációjú -szuszpenziók hidrokortizon-átalakíiásra, ahol a kapott prednizolon 5—6%, sőt néha 10% átalakultatlan. hidrokortizont tarifeimaz (E. Kondo; E. MaSuo J. Gen, Appí. Microbiol., 7, 113 ;(1961.). Ezeknek az eddigi eljárások porán felmerülő hiányosságoknak a kiküszöbölésére szükséges tehát a mikrobiológia 1,2-déhidrö'gén.ezés hatásfókának a javítása, főleg szükséges ez ahhoz, hogy a Corynebacterium tenyészetekkel végzett szuszpenziós hidrokortizon-átalakiitás iparilag előnyösen alkalmazhatóvá váljék. A jelen találmány tárgyát olyan eljárás képezi, amely lehetővé teszi a kortíkoszteroídok 0,4—30,0 mg/ml koncentrációban Corynebacteriumokkal a C-l ,2-helyzetfben 98%-ot elérő hatásfokkal) történő dehidrogénezését, anélkül, hogy ehhez az átalakítási idő jelentős növelése lenne szükséges vagy .a korábíbi élj árasokhoz képest romlanék a kitermelés. A tiaüálanány szerinti eljárás a magas átalakítási hatásfok elérése érdekében előzetesen indukálja az. átalakításihoz használt tenyészetben a szteiroid-l,2^diéhidrogenáz képzését és az indukció számára olyan kedvező feltéttelekéi: biztosít, meíyie.k folytán a baktériumitenyészet C-l,2-dehidrogenáz -aktivitásia az inidukaió végén a korábbi eljárásokban elért maximális szint 4—5-szörösét éri él, ugyíaraakkor pedig a nem kívánatos ímellékífuinkciófcra vonatkozóan az aktivitás nem növekszik meg. Az indukciót követő átalakításban az első percektől egyenletesen és nagy sebességgel megy végbe a kívánt termék képződése, ugyanakkor :l // ( — i /r r ére csökken a mellékíunikcióknak — mint a C-l,2-riedukción,ak, 20-kéto redukciánlaik és szteroidHmetaboliz ál ásnak — a főíumíkeióhoz viszonyított sebessége. A találmány azon a felismerésien alapul, hogy a sztieroid-l^-dehidrogeriáz indukciójának sebessége és a kialakult enzim mennyisége akkor a legnagyobb, ha a tenyészetet la növekedési sHakban indukáljuk, tehát a kívánlt lenzimet akkor isziRitetizáltatjuk, amikor a baktérium tápanyagfelvétele és sejitanyagszintézise a legaktívabb. Felismertük és. számszerűen kimutattuk azonbap ,aet is, hegy épipen ebiben az aktív anyiafgcsere-^szakban legmagasabb a baktériuínt.en.yésizlat reidükálókészsége, ami kortikoszteroidok jelenttétéibén a 2Ö-fcetö csoport 2Qß—OH csoportitá történő átala;kí|tásábiain és a C-l,2-déhidrögáhézett tanmék telítésében, vi'ssztalBkításálba-h nyilvánul me|g és a. legnagyobb mértékű a szteroid tnetaböliSLlálása, a jelenlevő átalakítandó vegytíleSt s<zéníór,ráskéttt történő felhasználása, lebonitása is. 10 15 20 25 S0 35 40 45 50 55 60 2
