158742. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 18 631 R. P. antibiotikum előállítására
158742 19 20 Az egész oldat át/bocsátása után a gyantát felülről lefelé, 25 liter/órára beállított ütemben sorban a következő elegyekkel mossuk: 50:50 tf/tf metanol-víz 60:40 tf/tf, 10 g/liter NH4 C1 tartalmú metanol-,víz 60:40 tf/tf, 15 g/liter NH4 C1 tartalmú metanol-víz 60 liter 5 80 liter 80 liter Ezután a 18 631 RP antibiotikumot 80:20 tf/tf, 30 g/liter NH4CI tartalmú metanol-víz eleggyel eluáljuk (240 liter 30 liter/óra ütemben). Az eiuátumot csökkentett nyomás alatt és 40 C°-nál alacsonyabb hőfokon 30 literre koncentráljuk, és az 5,2 pH értékű konoentrátumot 2 íziben 30 liter kloroformmal extraháljuk. A kloroformos kivonatot csökkentett nyomás alatt kis térfogatra bepároljuk, és az antibiotikumot terc.-butanolba visszük át (a butanolos oldat térfogata 1O00 ml). Az inaktív oldhatatlan anyag eltávolítása és liofilizálás után 25 g tisztított 18 631 RP antibiotikumot kapunk 320 /xg/mg literrel. 7. példa: A 6. példa szerint készült 10 g 18 631 RP antibiotikumot feloldunk 800 ml etilacetátban, derítés után az oldatot felöntjük egy 50 mm átmérőjű, 750 g, előzőleg híg kénsavval mosott alumíniunioxidot tartalmazó oszlopra, majd az oszlopot 5 liter etilacetáttal mossuk, és végül az antibiotikumot 1 liter metanollal eluáljuk. A metanolos oldatot csökkentett nyomás alatt kis térfogatra bepároljuk, és az antibiotikumot koncentrálással átvisszük etilacetátba, ahol kikristályosodik, így 1,16 g kristályos terméket kapunk 945 /xg/mg titerrel. 8. példa: A 7. példában leírt körülmények között készült 4,1 g antibiotikumot feloldunk 450 ml dioxánfoan. Az oldat derítése után keverés közben lassan hozzáadunk 450 ml desztillált vizet, mire a 18 631 Rp kikristályosodik. Szűrés, vizes mosás és szárítás után 3,6 g fehér kristályt kapunk 10,00 /xg/mg titerrel. Olvadáspontja 204 C°; [«]20 D = —68 ±1,5 ]20 4"6 = —199±2,5C (c = 1, etanolban). Összetétel: C 59,4, H 5,45. O 25,1, N 4,0, Cl 5,1%. 9. példa: A 7. példában leírt módon tisztított 0,5 g antibiotikumot feloldunk 20 ml acetoníban, és 10 ml víz lassú hozzáadásával kikristályösítjuk. így 0,445 g finom fehér tű alakú kristályokat kapunk 994 /xg/mg titerrel; fizikai-kémiai tulajdonságai azonosak a 8. példa szerint kapott termékéivel. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10. példa: 170 literes fermentorba betöltjük a következő anyagokat: pepton (Cr = 3,5%) húskivonat (Cl- = 1%) kukoricakeményítő esapvízzel kiegészítve 1200 g 600 g 120-0 g 110 literre. A keverék pH-ját 120 ml 10 n nátronlúggal beállítjuk 7,1 értékre, majd a közeget 122 C° hőmérsékletű gőz 40 perces átbuborékoltatásával sterilizáljuk. Lehűtés után a táptalaj térfogata 120 liter, pH-ja 7,1. Ezután beoltjuk Streptomyces roseochromogenes var. oscitans DS 12 976 200 ml rázatott Erlenrheyer-tenyészetével. A tenyészetet 30 C°-on 27 óra hosszat keverés és steril levegővel való levegőztetés közben fermentáljuk; í gy alkalmas a termelőtenyészet beoltására. A termelő fermentációt a következő anyagokkal töltött 800 literes fermentorban végezzük: szeszmoslék 20 kg részben dextrinné hidrolizált keményítő 5 kg köbaltklorid-h exaihidrát 10 g csapvízzel kiegészítve 405 literre. A pH-nak 1800 ml 10 n nátronlúggal 7.5 értékre való beállítása után hozzáadunk 2,5 kg kalciumkarbonátot, majd a táptalajt 122 C°-os gőz bevezetésével 40 percig sterilizáljuk. Lehűtés után a táptalaj térfogata 450 liter. Ezt 50 liter 12,5 kg Cerelose-t és 5 liter 1 kg ammóniumszulfátot tartalmazó steril vizes oldatot tartalmazó steril vizes oldat hozzáadásával 50 literre egészítjük ki. A pH 6,60. Ezután a táptalajt beoltjuk az említett 170 literes fermentorban készült 50 liter oltótenyészettel. A fermentációt 33 C°-on 119 óra hoszszat végezzük, percenként 205 fordulatú keverővel való keverés és 25 m3 /óra térfogatú steril levegővel való levegőztetés közben. Ekkor a közeg pH-ja 8,60 és a fermentlé térfogata 470 liter. A fermentlé titere 288 /xg/ml. 11. példa: A 10. példában leírt körülmények között kapott és 238 /xg/ml titerű 990 liter fermentlevet keverővel ellátott tartályba öntjük. A fermentlé pH-ját 10 liter 5 n sósavval 5 értékre állítjuk be. Fél órai keverés után hozzáadunk 50 kg szűrést elősegítő anyagot, és a szuszpenziót szűrőprésen megszűrjük. A szűrőlepényt 200 liter vízzel mossuk, SS cl Z összesen 1025 liter szűredéket kiontjuk. A kapott 199 kg szűrőlepényt keverés közben 600 liter metanolt tartalmazó 750 liter víz-metanol elegyben szuszpendáljuk. A keverék látszólagos pH-ját 1 liter 5 n nátronlúg hozzáadásával 7 értékre állítjuk be. 10
