158742. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 18 631 R. P. antibiotikum előállítására
158742 21 22 A keverést 1 óra hosszat folytatjuk, majd a keveréket szűrőprésen megszűrjük. A szűredéket felfogjuk, és a szűrőlepényt 100 liter 30 térfogatszázalékos víz-metanol eleggyel mossuk. A szűredék és a mosóvíz összes térfogata 840 liter, tiíere 285 /tg/ml. A szűrőlepényt elvetjük. Az alkoholos szűredéket 35 torr nyomás alatt 35 C°-on 100 literre koncentráljuk. A koncentrátumot keverővel ellátott tartályba öntjük, hozzáadunk 50 liter n-butanolt, és a vizes fázis pH-ját 5 n sósavval 3 értékre állítjuk be. A keverést 30 percig folytatjuk, maj! d az elkü-/ lönült felső fázist dekantáljuk. Az extrahálást 30 liter n-butanollal megismételjük. A kimerült anyalúgokat kiontjuk. A két kivonatot (98 liter) egyesítjük, és 10 liter vízzel mossuk. A mosóvizet kiontjuk. A butanolos kivonatot mossuk, és 20 torr nyomás alatt 37 C°-on 3 'liter térfogatra koncentráljuk. A koncentrátumot nátriumimetilát 25%-osn-butanolos oldatával 7 pH-ra közömbösítjük. A közömbösített koncentrátumot 30 liter hexánnal kicsapjuk. A nátriumsó alakjában lévő nyers antibiotikumot szűrőre visszük, hexánnal mossuk, és 3 torr nyomás alatt 40 C°-on megszárítjuk. Így 477 g nyers liS 631 RP antibiotikumot kapunk 435 /ig/mg titerrel. 12. példa: A 11. példában leírt módon készült, 332 /ag' /mg titerű 1345 g nyersterméket feloldunk 30 liter 1:1 térfogat arányú metanol-víz elegyben; a kapott oldatot felöntjük egy 15 cm belső átmérőjű, 30 liter kloridfázisú Dowex 1X2 gyantát tartalmazó oszlopra, a kifolyás ütemét 30 liter/órára beállítva. Amikor áz egész oldat áthaladt, a gyantát felülről lefelé sorban mossuk óránként 25 liter ütemben a következő elegyekkel: 50:50 tf/tf metanol-víz 20 liter 60:40 tf/tf, 15 g/liter NH4 C1 tartalmú metanol-víz 120 liter 70:30 tf/tf, 15 g/liter NH4 C1 tartalmú metanol-víz 60 liter Ezután az antibiotikumot 80:20 térfogatarányú, 30 g/liter ammóniumkloridot tartalmazó metanol-víz eleggyel eluáljuk (li20 liter hat 20 literes részlegben). Az aktivitás zömét tartalmazó 2., 3. és 4. frakciót csökkentett nyomás alatt 40 C°-nál alacsonyabb hőmérsékleten 30 literre koncentráljuk. A koncentrátumot extraháljuk a pH módosítása nélkül 1 ízben 15 liter és 2 ízben 7,5 liter etilacetáttal. A kivonatokat egyesítjük, 5 liter vízzel mossuk, nátriumszulfát fölött megszárítjuk, és csökkentett nyomás alatt 40 C°-nál alacsonyabb hőmérsékleten 10 literre koncentráljuk. Az így kapott oldatot felöntjük egy 5 cm belső átmérőjű, előzőleg 4 pH-nál mosott 500 g alumíniumoxidot tartalmazó oszlopra. Amikor minden oldat áthaladt, kifejlesztjük 2 liter etilacetáttal. 10 20 25 ;.o 40 50 55 60 65 A távozó folyadékot és a mosóvizeket egyesítjük, és térfogatuk tizedrészére koncentráljuk csökkentett nyomás alatt, mire megindul a kristályosodás. Jégfürdőben való 2 órai állás után a kristályokat kicentrifugáljuk, 200 ml hideg etilacetáttal mossuk, és 24 óra hosszat 40 C°on 5 tormái alacsonyabb nyomás alatt megszárítva 170 g 18 631 RP kristályos terméket kapunk 855 ,ug/mg titerű szabad sav alakjában. A Dowex lX2-vel végzett kromatografálás 5. és 6. frakciójából ugyanilyen módon 35 g 702 /ig'mg titerű kristályos terméket kapunk szabad sav alakjában. (A kristályosítási anyalúgokat koncentrálva és hexánnal kicsapva további 124 g termék nyerhető vissza 250 /xg'mg titerrel). 13. példa: A 1.2. példában, leírt módon készült 276 g antibiotikumot 30 C°-on feloldunk 2,4 liter 5:1 térfogatarányú aceton-dioxán elegyben; az oldatot derítjük, majd 3 óra alatt keverés közben szobahőmérsékleten lassan hozzáöntünk 2,5 liter vizet. Szobahőmérsékleten éjjelen át való állás után a kristályokat kicentrifugáljuk, 1 liter vízzel mossuk, és 1 torr nyomás alatt 60 C°-on 48 óra hosszat szárítjuk. így 23il g 18 631 HP antibiotikumot kapunk szabad savként 990 ítg/img titerű fehér kristályok alakjában. A termék fizikai-kémiai tulajdonságai a következők: Összetétel: C 60,0—60,3, H 5,4—5,5,0 24,9— —25,0, N 3,9—4,1 és Cl 4,75—4,95%. Számított összetétel C^HsvOuNzCl: C 60,29, H 5,35, O 25,34, N 4,02, Cl 5,09%. Optikai forgatóképesség: [a]2 » D = —67 ±1,5°, [,a]20436 = —196+2,5° (c = 1, etanolban). Ultraibolya színkép (meghatározva 10. mg/ /literes kloroformos oldatban): abszorpciós maximum abszorpciós minimum váll abszorpciós maximum 275 nm 298 mm 307 nm 338 nm 14. példa: A 12. példa szerint kapott 164 g szabad sav alakú kristályos antibiotikumot feloldunk 500 ml acetonban, az oldatot Clarcel DIC rétegen átszűrve derítjük, majd lassú keverés közben 1 1/2 óra alatt hozzáadunk 4,i5 liter 50:50 térfogatarányú acetonitril-ivíz keveréket. Szobahőmérsékleten éjjelen át való állás után a kapott kristályokat szűrőre visszük, 1 liter 50:50 térfogatarányú aceton-ivíz eleggyel, majd 1 liter vízzel mossuk, és 48 óra hosszat 50 C°-on 5 tormái kisebb nyomás alatt szárítjuk. így 124 g szabad sav állapotú 18 6:31 RP antibiotikumot kapunk 1000 ^g/img titerű fehér kristályok alakjában; fizikai-kémiai tulajdonságai azonosak a 13. példa szerint kapott termékéivel. 11
