158742. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 18 631 R. P. antibiotikum előállítására
158742 15 16 mot vízzel neim elegyedő oldószerrel, például a fent említettekkel, extraiháljuk. Az antibiotikum a végső koncentrátumban általában s)a.v alakjában van oldva. A 18 631 RP nyers antibiotikum leválasztása megkönnyíthető nátriumanetiiátnak ia koncentrátumhoz adásával. A nyers 18 631 RP antibiotikum vagy nátriumsója megtisztíttató oly módon, hogy azt egy erősen anionos, nagyporozitású ioncserélőn, például 1X2 Dowex gyantán (kloridfázis) rögzítjük, majd egy • elektrolitot tartalmazó vizes-alkoholos eleggyel, előnyösen 30 g/Jütor amimóniumkloridot tartalmazó, 80 : 20 *srfogátarányű metanol-víz eleggyel elüáljuk. Miután a metanolt csökkentett nyomás, alatt eltávolítottuk, az antibiotikumot az éluéíbumfoól vízzel nem elegyedő oldószerrel, előnyösen kloröíoinmmial vagy etilaoetóttai eluáljük. Ezután a 18 631 RP antibiotikumot kiválasztjuk szilárd alakiban egy rossz oldószerrel, például 'hexánnal vagy széntetrakloriddiail való kicsapássial, vagy tercier hutanolfo-a való átvitel után való lioíilizálással. A tisztítás második lépésében az antibiotikumot egy kevéssé poláris oldószerében, például etilaeeitátíban oldva alumíniumoxid oszlopon kroniatografáljuk, majd egy olyan poláris oldószerrel eluáljük, amelyben jobban oldódik, például metanollal. A végső tisztítás különféle módszerekkel, mint például ellenáramú megosztással vagy kristályosítással hajtható végre. Az ellenáramú megosztással történő tisztítás például széintetraklorid-kloroforrnnmetanol-víz (10 : 3 : 10 : 2 tér fogatarány) rendszerben végezhető (megosztási tényező, K = 0,65). A kristályosítás végrehajtható vagy egy kloroformos vagy etilacetátos oldat [koncentrálásával, vagy az antibiotikum oldatához egy azt rosszul oldó oldószer hozzáadásaival; a'ikalmas oldószerpárok például: kloroform-iszéntetraklorid, aceton-víz, acetón^acetonitriil, dioxán-víz. A következő példáikban szemléltetjük a találmány szerinti eljárás gyakorlati végrehajtását anélkül, hogy a szabadalom oltalmi körét ezekre kívánnánk korlátozni. A továbbiakban a hatékonyság meghatározására diffúziós módszerrel végzett biológiai próbát használtunk, érzékeny baktériumként Micrococcus pyogenes albust alkalmazva, és taz eredményt 1000 /íg/mgos standardként egy tiszta 18 631 RP mintára vonatkoztatva. Ezt a hatékonyságot (titert) oldatok esetéiben /Ag/om'^ben és szilárd termékek esetéiben /xg/mg-iban adjuk meg. 1. példa: Egy 75 literes ferinentort megtoltunk a következő anyagokkal: kukorioalekvár (50% száraz kivonat) 8:00 g szacharóz kialoiumkarbonát arnrnóniumszulfát csapvízzel kiegészítve 1200 g 300 g 80 g 35 lite irre 10 Ennek a keveréknek a pH-ja 6,10. A közeget 122 C°-os vízgőz átbuborékoltatásával 40 percig sterilizáljuk. Lehűlés után a térfogata 40 liter, és ia pH-ja 7,10. Ezután beoltjuk Streptomycas hygroscopicus DS 9 751 rázott Erlenimeyer-lombikiban készült 200 mines tenyészetével. 27 C°^on 48 óra hosszat keverés és steril levegővel való levegőztetés közben fermentálunk; ekfcor iá fermentlé készen van a termelő tenyészet beoltására. A termelő tenyésztést a következő anyagokkal töltött 30 literes íermentorban végezzük: szeszmoslék 15 cereilóz szójaolaj kobialtkloi-id-hexahidrát vízzel kiegészítve 20 25 30 750 g 150 g 225 cm3 0,02 g 15 literre A pH-nak 65 cm3 10 n nátronlúggal 8,6-ra történő beállítása után hozzáadunk 75 g kaL-ciumkarfoonátot, majd a közeget 120 C°-on 40 percig sterilizáljuk. Lehűlés után a térfogata 14 liter. Ezt kiegészítjük 15 literre 30 g ammóniumszulifátot tiartalmazó 1 liter steril vizes oldat hozzáadásával. A pH ekkor 7,0. Ekkor a közeget beoltjuk a 75 literes fermentoríban készült 1 liter oltóanyaggal. A fermentációt 27 C°-on 161 óna hosszat végezzük, miközben percenként 240 fordulatú keverővel keverjük, lés óránként 1 m3 steril levegővel levegőztetjük. A fermentlié pH-ja 8,0, és térfogata 10,5 liter. A jelenlévő antibiotikum mennyisége 9 /ig/em:! . 2. példa: Egy 170 literes fermentorba töltjük a követ-40 kező anyagokat: pepton (CT = 3,50/0) húskivomaí (Cr = 1%) kükopicakeményítő vízzel kiegészítve 1200 g 600 g 1200 g 110 literre. 50 55 60 A közeg pH-ját 95 ml 10 n nátronlúggal beállítjuk 7,0-ra. A közegeit 122 €°-os gőz átibuborákoíltatásávial 40 percig sterilizáljuk. Lehűlés után a térfogat 120 liter' és a pH 7,0. Ekkor beo ltjuk Streptomyces. albocinerescens DS 21 647-nok rázott Erlensmeyer-lombikban készült 200 ml-es tenyészetével. A tenyésztést 22 óra hosszait 30 C°-on végezzük keverés és steril levegővel való levegőztetés közben; ékkor kész a termelő tenyészet beoltására. A termelő tenyésztést^ a következő anyagokkal töltött 800 literes f érmen torban végezzük: szeszmoslék 16 kg részben dextninne hidrolizált keményítő 4 kg kcibaltlklorid-hexahidrát 8 g 65 vízzel kiegészítve 330 literre. 8
