158649. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kumermicin A1 - és kumermicin A2 - származékok előállítására
9 158649 10 bakteriális fertőzéseinek kezelésekor a legelőnyösebb a találmány szerinti vegyületeket 100—500 mg dózisban naponta 3—4-szer adagolni. Az alábbi példákban leírt mérési módszer egy módosított kumermicin Aj-meghatározás, Petri-csészékét használva, amelyeiét 10 ml Baltimore Biological Laboratories (BBL) agárral és felső rétegként 4 ml Staph, aureus ATCC 6538 P törzzsel inokulált BBL agárra* készítünk. A lemezeket 15 órán át 30 C°-on inkubáljuk. A mérés során standardként alkalmazott találmány szerinti vegyület a 3-benzamido-4--hidroxi-"8-metil-7-3-Oj(5rmetil-2-pirrolilkarbonil)novoziloxi-kumarm (BL—03) és ennek az aktivitását 100 mcg/mg-mal jelöljük. Az összes találmány szerinti vegyület értékeit BL—C3 egységekben fejezzük ki. 1. példa: 3-izobutiramido-4-hid, roxi-.8-metil-7-[3-0-{5--imetil-2Hpárrolidillka^bonil)-noviozrloxi]-kuim-arin . (IX képlet) 50 g 2,2'-ditetrahidropiranil-kumermicin Ax -et (39,11 millimól) 600 ml tetnahidrofuránban 25 C°-on keverés közben oldunk. Öt egyenértéknyi trietilamint (19,7 g, 27,15 ml; 195 mmól) adunk hozzá négy egyenértéknyi izobutiranhidriddel (24,7 g, 26,05 ml, 156,4 mmól) együtt, a keverést 25 C°-on tovább folytatva. Az elegyet 7—-8 órán át 65 C°-on visszafolyató hűtő alatt forraljuk. A reakcióelegyet vákuumban bepároljuk kb. 200 ml térfogatra és azonnal 2000 ml erősen kevert Skellysolvé—B-foe öntjük. A fehér csapadékot leszűrjük, Skellysolvé—B-vel mossuk és szárítjuk. Termelés: 72 g. Ezt az imid elegyet 1440 ml (20 mg/g) piridinben oldjuk és 55—60 C°-os olajfürdőn 24— 36 órán át keverjük. A piridint vákuumban kb. 200—300 ml végtérfogatig lepároljuk és a maradákot 3000 ml erősen kevert jeges vízbe öntjük. A pH-t 6 n sósavval 1,5-re állítjuk be, 30—45 perces keverés Után a csapadékot leszívatjuk, vízzel mossuk és szárítjuk. Termelés: 65—70 g. A nyers amid keveréket 1400—1500 ml metanolban oldjuk és annyi acetont adunk hozzá (kb. 1500 ml-t), hogy tiszta oldat keletkezzék. A reakcióelegyhez 14,0 g (0,2 egyenértéknyi) p-taluolszulifonsavmnonohidrátot adunk és az elegyet 25 C°-on 48 órán át keverjük. A reakcióelegyet leszűrjük az oldhatatlan anyag eltávolítása céljából és a szűrletet vákuumban kb. 7s—Vs-ára pároljuk be (ezen a ponton, ha szükséges, szűrés is ajánlatos). A bekoncentrált oldatot 3000 ml erősen kevert vízbe öntjük és 30—45 perc múlva a csapadékot leszívatjuk, vízzel mossuk, és szárítjuk. Kitermelés kb. 35 g. Ezt a csapadékot 1500 ml forró etilacetátban oldjuk és az oldhatatlan anyagot szűréssel eltávolítjuk. Az etilacetátos oldatot 1X1030 és 2X500 ml 5%-os vizes nátriumbikarbonátoldattal .extraháljuk. Az etilacetátos frakció tartalmazza a kívánt X képletű vegyületet. Ezt vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk és kb. 300—500 ml térfogatra bepároljuk. Skellysolvé B-vel végzett frakcionált kicsapással 4,5—5,0 g fehér kristályos termék keletkezik.' (11,96%) Op.: (korrigálatlan) 173—175 C°, habzás közben. Lemezes vizsgalat: 450 egység (BL—G3.) Analízis C2 8H :4 O 10 N2-re: Számított: C: 60,20% H: 6,14% N: 5,01% Talált: C: 60,15% H: 6,31% N: 4,80%. 2. példa: 3-{3,3-dimetilbutiramido)-4-hidroxi-<8-metil-7--[>3-0-(5-^metil-2-pirrolilkarbonil)novioziloxi]kumarin 10,81 ml (10,53 g; 78,2 millimól) 3,3-dimetilbutirilklorid 45 ml tetrahidrofurános oldatát lassan 25 g (19,55 millimól) 2,2-ditetrahidropiranilkumermicin Ai 500 ml piridines kevert oldatához csepegtetjük 25 C°-on. A reakcióelegyet 94 órán át 25 C°-on keverjük, majd azonnal 2500 ml kevert jeges vízbe öntjük, a pH-t 6-n sósavval 1,'5-re állítjuk be és a vizes elegyet 1 órán át keverjük. A szilárd fázist ezután leszívátjuk, vízzel mossuk és szárítjuk. Eauitán 750 ml piridinben újraoldjuk, 55—00 C°-os olajfürdőre helyezzük és ezen a hőmérsékleten 24 órán át keverjük. A reakcióelegyet vákuumban sziruppá pároljuk be, néhányszor acetonnal felszuszpendáljuk és vákuumban ismét sziruppá pároljuk be. A szilárd anyagot 300 ml acétonban és 1,000 ml metanolban oldjuk, 6,0 g p-toluolszulfonsavat adunk hozzá és 25 C°-on 24 órán át keverjük. A reakcióelegyet leszívatjuk, a szűrletet vákuumban 1 I 3 térfogatra bepároljuk és 2500 ml erősen kevert vízbe öntjük. 45 percig keverjük, majd a terméket leszívátjuk, vízzel mossuk és szárítjuk. Termelés 17,í2 g. A nyers anyagot 400 ml forró etilacetátban oldjuk és a nem oldódó anyagot szűréssel eltávolítjuk. Az etilacetátos oldatot 4X500 ml 5%-os vizes QNTaHiCOs oldattal extraháljuk. Az oldatot .vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban szárazra pároljuk. A szilárd anyagot 60 ml kloroformban újraoldjuk és n-hexánnal frakcionáltan kicsapjuk úgy, hogy 6 frakciót kapunk. Az 5. és 6. frakció infraspektrumban 2950 cm^-nél (GHy^-ra és/vagy a " tetrahidropiranil védőcsoportra erős maximumot ad. Az 5. és 6. frakciókát 209 ml metanolban ismét oldjuk, 500 mg 10 15 20 25 S0 35 40 45 50 55 60 5
