158546. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az aminocsoportok átmeneti megvédésére peptidszintéziseknél
158546 13 14 290 mg diciklahexilkarbodiimidet csepegtetünk hozzá. Három órás köverés után szűrjük és három-Jhárom íziben 10—10 ml metilénkloriddal, dimetilformamiddal, dimetilformamid-metano] (1 : 1) eleggyel és metilénkloriddal mossuk. Ez- 5 után az Na-i2-(p-difenil)-izopfropiloxikarbonil-N<-BOC-Lys-Gly-gyaiitát 5 ml metilénkloridban szuszpendáljuk és 3,7 ml 37,6 g klórecetsav-12,5 ml víz oldattal elegyítjük. Ezt 1 1/2 óráig keverjük, majd a fentiek szerint metilén- io kloriddal, dioxánnal, metilénkloriddal, metilénkloria tirietilamin (9:1) eleggyel és metilénkloriddal mossuk. A keletkezett H-Lys-i(BOC)-Gly-gyanitát 0,37 g karbobenzoxi-L-ifenilalanin (Z-Ph'e-OH) 8 ml metilénkloridos oldatának js hozzáadása után 5 percig keverjük, majd 290 mg diciklohexiikarlbodiimid kevés metüénkloridos oldatáéval elegyítjük és 3 órán át keverjük. A Z-<Fhe-Lys-i(BOC)-Gly-gyantát ismét a fentiek szerint szűrjük és metilénkloriddal, 20 dimetilformamiddal, dimetiíf ormamid-metanol (1 :1) eleggyel, metanollal és etanollal mossuk. Ezután a gyantát 10 rnl etanoHiidrazinhidrát. (3 : 1) eleggyel 15 óra hosszat keverjük, leszűrjük és többször etanollal mossuk. Az egyesített 25 szűrleteket vákuumban szárazra pároljuk és a hidrazinhidrát eltávolítása céljából nagyvákuumban 50°-on koncentrált kénsav felett szárítjuk. A maradékot 5 ml forró etanolban oldjuk, leszűrjük a kevés oldhatatlan anyagtól és s0 melegen kb. 15 ml vízzel elegyítjük. Beoltás után lassan szobahőmérsékletre hűtjük. A kikristályosodott terméket leszűrjük és etanol-víz (1 : 3) eleggyel mossuk. 185 mg Z-Phe-Lys-(BOC)-Gly-iNHN'Ha-t kapunk. Op.: 183—164°. 10. példa: 40 L-'propil-Lritirozil-HÍNí-Jtercier-íbutiloxikarbonil)-L-lizil-L-Hmetionin-lhidrazid előállítása 2-p-difenilizopropiloxikarbonil-icsoport felhasználásával a) 6,7 g (10 mmól) iNa^-Íp-difeni^-izopropiloxiíkariboml-Nfi-BOiC-L-lizm-4iciklohexiliamimió- 4D niumsó .40 ml dimétilfonmamidos oldatához —li5°-on keverés közben l,i25 ml pivaloilkloridot adunk és 5 percig —10c -on keverjük. Ezután nitrogén átvezetése mellett 2,0 g L-metionin-metilészter4iidrokloridot és 1,4 ml trietil- 50 amint csepegtetünk hozzá és 3 órán át 0°-on keverjük. Ecetsavval hígítjuk, három-három íziben 0°-on 0,1 mól citromsavolídattal, szobahőmérsékleten 2 n fltóliumkaríbonéit-dldattal és vízzel kirázzuk és vákuumban szárazra párol- S5 juk. A nyersterméket (6,5 g) kloroformban 150 g kovaföldet tartalmazó oszlopon leszűrjük. Így 4,7 g Na-2-(p-difenil)-izopropiloxikarbonil-Nf-BOC-L-hzil-L-anetionin-metilészitert kapunk, színtelen gyanta formában, Rf = 0,55 kloroform- 60 -aceton (8 : 2) elegyben. b) A fenti dipeptidészter 3,15 g-ját (5 mmól) 50 ml jégeoetH82,8%J os hangyasav-wíz (7:1: 2 tf. rész eleggyel 1 1/12 órán át kever jük, majd 65 0°-on 50 ml ecetészter és 20 ml telített káliumkarbonát elegyéhez öntjük. Az eoetészteres oldatot vízzel, mossuk, szárítjuk és kíméletesen bepároljuk. A keletkezett Ní-BOC-L-lizil-L-metionin-metilészter bomlékony, ezért azonnal tovább fel kell dolgozni. c) Ebből a célból a maradékot nitrogénáramban 0°-on 18 ml acetonitrilben oldjuk, 2,10 g (5 mmól) N-2-(p-difenü)-izopropEoxi-kax!bonil-L-tirozin (a cikldhexilammóniumsójából citromsiaivval felszabadítva) 2 ml dimetilforanamidos oldatával és 1,15 g diciklöhexilkiarbodiimiddel elegyítjük és 20 órán át 0°-on keverjük. A kiváló diciklohexilkarhamidot leszűrjük, a szűrletet bepároljuk, a miaradékot éter-petroléter eleggyel eldörzsöljük és eoetészter-petroléter elegyből kicsapjuk. 2,8 g N-!2^(p-difenil)-izopropiloxikiarbonil-Lr-tirozil-OSÍs-BOC-L-lizií-L-mietionin-metilésztert kapunk, vékonyréteg-fcromatográfiásan egységes por alakban. Rf = = 0,2 kloroform-aceton (8 : 2) elegyben. d) A fenti tripeptidészter 2,38 g-jálhoz 30 ml jégeoet-82,8%r-os hangyasav-wíz (7 : 1 : 2 tf. rész) elegyet adunk és 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldatot jeges vízre öntjük, éterrel kétszer extraháljuk, a vizes oldatot telített Mliumlfearbonát-oldatital lúgosítijuk és ecetésztarrel extrahálíjuk. Az eoetészter lepárlása után 1,33 g L-tirozil-INs-BOC-L-lizil-L-anetionki-imetilésztér marad vissza színtelen bab formában. Rf = 0,5 kloroform-metanol (85 : 15) elegyben. e) A fenti tripeptidészter 1,11 g-ját (2 mimól) 0,71 g (2 mmól) N-2-(p^difen£)-izopropiloxikarbonil-L-prolin (diciklohexilamimóniumsójából felszabadítva) 6 ml acetonitriles oldatában oldjuk, 0°-on 450 mg dictfKlaheXíilkarbodiimiddel egyesítjük és 18 órán át 0°-on keverjük. A kivált dicilklohexifkarbamidot leszűrjük, a szűrietet ecetészterrel hígítjuk, 0°-on háromszor 0,1 mól citromsawal, szobahőmérsékleten 2 n káliumfcaiibonát-oldattal és vízzel kirázzuk, szárítjuk és vákuumiban szárazra pároljuk. Az N-^2-(p-difenil.)-izopropiloxikarbonil-L-prolil-L-tirozil-Ns-BOC-L-lizil-Lrtmetionin-metilészítert kvantitatív kitermelésben (1,8 g) kapjuk. f) A fenti terméket 22 ml jégecet-82,8%~f>s hangyasav-víz (7:1: 2 tf. rész) eleggyel 1 órán át keverjük. Az oldatot jeges vízzel egyesítjük, éterrel kétszer extraíháljulk, a vizes oldatot telített káliumkarbonáttal meglúgosítjuk és ecetészterrel extraháljuk. Szárítás után az ecetésztert vákuumban teljesen lepároljuk. 1,02 g L-prolü-L-(tirozil-íNs-BOCHL-lliz,il-Lmmetionin-<metilészter marad vissza, Rf = 0,25 kloroformmetanol (85 :15) elegyben. A terméket acetonitrilből is kikristályosíthatjuk; op.: 177—130°. g) A tetrapeptidészter 326 mg-ját 1 ml forró metanolban oldjuk, nitrogénáramban szobahőmérsékleten 0,25 ml hidraztahidrattal egyesítjük és 18 órán át zárt edénylben állni hagyjuk.
