158546. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az aminocsoportok átmeneti megvédésére peptidszintéziseknél

158546 15 16 A kikristályosodott termeket leszűrjük és vízzel mossuk. 225 mg L-prolil-L-tirozil-Ns-BOC-L-lizil-L-metionin-hidrazidot kapunk. Op.: 206—207°. 11. példa: .L-PiroliJ-L-tirozil-L-(Nf-tercier^butik>xikarbonil)-lizil-L-metiomn-íhickazid előállítása a szilárdanyaghordozós szintézis szerint 2^(p-difeníl)-izopropiloxil

karbonü-osoport felhasználásával a) 4,9 g BOC-metioningyantát (sztirol-divinilfoenzol-kopolimér, 0,18 mól aeq. BOC-metionin/g gyanta = 0,88 mmól tartalommal) 50 ml-es Merrifield-edényfoen nitrogénatmoszférában egymásután a következő reagensekkel rázunk ki, melyeket mindig újra leszűrünk; 1. 25 ml dioxánnal 4 percig; 2. 20 ml 4-N dioxános sósavval 60 percig; 3. Háromszor 20—20 ml dioxánnar3—3 percig; 4. Háromszor 20—20 ml etanollal 3—3 percig; 5. Háromszor 20—20 ml kloroformmal 3—3 percig; 6. 20 ml kloroform-trietilamin (9 :1) eleggyel 10 percig; 7. Háromszor 20—20 rnl kloroformmal 3—3 percig; 8. Négyszer 20—20 ml metilénkloriddal 3—3 percig. A megmaradt metioningyantát metilénkioriddal nedvesen félretesszük (összesen 17 ml metiliénkloridot tartalmaz). 1,87 g N!a-1

2-(p-difenil)-iaopropiloxiisaribonil-N^-tercier-'butiloxi-ikarbonil-L-lizin-diiciiklohexilanimóniumsóból a 9. példában leírtak alapján felszabadítjuk a védett L-lizint. A keletkezett metilénikloridos oldatot a fenti gyantáihoz adjuk, 10 percig rázzuk, majd 730 mg diciklohexilkaribodiimid 3 ml metilénkloridos oldatát csepegtetjük hozzá és az egészet 4 órán át rázzuk. A gyantát ezután rázás közben a következők szerint mossuk: háromszor 20—20 ml metilónkloriddal (3—3 percig), háromszor 20—20 ml metanollal (3—3 percig) és háromszor 20—20 ml metilénkloriddal (3—3 percig). A keletkező Nia~2~(p-difenil)-izopropiloxikarbonil-Ns-BOC-L-lizil-L-metionin-gyantát (17 ml metilénkloridot tartalmaz) az Na-2-(p-difenil)-izapropiloxijkarbonil-csoport lehasítása céljából 12,6 ml 75%-os vizes klórecetsavoldattal elegyítjük és 1 1/2 órán át rázzuk. A gyantát leszűrjük és rázás közben a következőképpen mossuk: háromszor 20^-20 ml metilénkloriddal (3—3 percig), 10 15 20 25 30 38 40 45 50 55 60 65 négyszer 20—20 ml etanollal (3—3 percig), egyszer 25 ml kloroformmal (3 percig), egyszer 20 ml kloroform-trietilamin (9 :1) eleggyel (10 percig), háromszor 20—20 ml kloroformmal (3—3 percig), háromszor 20—20 ml metanollal (3—3 percig), háromszor 20—20 ml metilénkloriddal (3:

—3 percig). A keletkezett N«-BOC-L-lizil-L-metionin-gyantát ezután a fentiek szerinti N-2-(p-difenil)-izopropiloxikanboni;

l-L-tirozinnál alkalmazottihoz hasonló módszer szerint alakítjuk át. E célból az anyag ciklohexilammóniumBÓgiánalk 1,6 g-ját 0°-on 25 ml ecetészterrel és 20 ml 1 mól citromsavoldattal a teljes feloldódásig keverjük. A vizes fázist elválasztjuk, az ecetésziteres oldatot mossuk, szárítjuk és vákuumban szárazra pároljuk. A kristályos maradékot 1 ml dimetilformamidban oldjuk, 10 ml metilénkloriddal hígítjuk és áz oldatot a fenti gyantához adjuk. Egyidejűleg még 710 mg hidroxiszuikcinimidet csepegtetünk hozzá. 10 perces rázás után 700 ml dicfldohexillkarbodiiimid 5 ml metiléaikloridos oldatát adjuk hozzá és 4 órán át rázzuk. Ezután a fent leírtak szerint a gyantát metilénkloriddal, metanollal és metilénkloriddal mossuk. Az N-2^(p-difenil)-izopmpi'o^fevr>vv-,il-csoport klórecetsavas lehasításánál is pontosan az előzőekben leírtak szerint járunk el. így L-tirozil-Ní-BO'C-L-lizil-L-jmetionin-gyantát kapunk, amelyet N-2-(p-difenil)-izopropiloxikarbonil-L-prolinnal metilénkloridban (amely 1,34 g diciklohexilammóniumsó metilénikloridos oldatában citromsavas felszabadítással keletkezett) kondenzálunk. A 'keletkező metilénküoridos oldatot 10 percig a gyantával rázzuk, majd 580 mg dicMohexilkarbodiimid 5 ml metilénkloridos oldatát adjuk hozzá, és 18 órán át rázzuk. A gyantát leszűrjük, a fent leírtak szerint teljesen átmossuk és az N-2-(p-difenil)-izopropiloxikarfoonil-csoportot klórecetsavval lehasítjuk. A szokásos mosási eljárások után keletkezett L-prolil-L-tirozál-N£-BOC-L-lizil-metionin-gyantát 20 ml etanollal kirázzuk, szűrjük és gyenge nitrogénáramban 7 ml etanollal és 3 ml hidrazinhidráttal 17 órán át keverjük. A gyantát leszűrjük és tízszer 10—10 ml etanollal átmossuk. Az egyesített »zűrieteket vákuumban 50°on bepároljuk és a maradékot nagyvákuumban kénsav felett megszárítjuk. A nyersterméket 25 ml 0,1 n ecetsaviban és 80 ml eceteszterben oldjuk és a vizes oldatot még kétszer 50—50 ml ecetészterrel kimossuk. A három ecetészteres oldatot még kétszer 10—10 ml 0,1 n ecetsavval extráináljúk. A három vizes extraktumot egyesítjük és liofilizáljuk. A további tisztítás 7 g CM-Sephadex-en kromatográfiásan történik, 300 ml 0,01 mól és 300 ml 0,05 mól ammóniumacetátot tartalmazó 6,5 pH-jú gradiens segítségéivel. A tiszta frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk. így 320 g L-prolil-L-tirozil-Nf-BOC-L-lizil-L-imetionin-ihidrazid-acetátot kapunk. A termák teljesen azonos a 10. példában leírt termiékkel. Rf = 0,35 vékonyréteg-kromaji