158336. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-) (cisz-1,2-epoxipropil)-foszfonsav előállítására mikrobiológiai úton

51 158336 52 matogram gazdag frakciót egyesítettük és csökkentett nyomáson kib. 100 mg/ml koncentrációig sűrítettük be. Az így kapott 660 ml koncentrátum hatékonysága 4,1 egység/ml volt. E koncéntráltum 100 ml-es részletét olyan oszlopon bocsátottuk át, amely sztirol-divinilbenzol mátrixra ágyazott, szulfonát típusú, hidrogén allakú, erősen savas kationcserélő műgyantából állott (a Dow Chemical Company cég ezt Dowex 50 x 2 néven hozza forgalomba). A kapott műgyanta adszorbátumot peroenkint 19 ml vízzel előhívtuk, és a felfogott eluátumot 20,5 ml-es frakciónkint gyűjtöttük, miközben az ehiátumot regisztráló refraktométerrel figyeltük. A 45—65. frakciót külön-külön titráltuk 7 pH értékig, 0,1 n nátriumhidroxid oldattal. Ezután az i52—62. frakcióit megvizsgáltuk és egyesítettük, hogy hozzájussunk az antibiotikum vizes oldatához. Ugyanilyen módon kromatografáltuk a koncentrátum öt további l'OO ml-es részletét az erősen savas kationcserélő műgyantán, és a kapott műgyanta eluátumok legnagyobb aktivitású frakcióit egyesítettük az 52—62. frakcióval. Így 1870 ml összes eluátumiboz jutottunk. A (—) (cis:z-l,2-epoxipropil)-foszfonsav pH értéke 6,8, összes szilárdanyagtartalma pedig 2,9 mg/ml volt, hatóértéke viszont 70 egységnyi volt ml-enkint. Az antibiotikum nátriumsójának hatékonysága ebben a vizes oldatban 24 egység/ml volt. Ezt követően a vizes oldatot csökkentett nyomáson besűrítettük, és fagyasztásos szárítással 4,7 g terméket kaptunk. Az így kapott termék szárított báktericid és rezisztenciás tulajdonságai a következők voltak: Baktériumellenes spektrum Vizsgálati mikroorganizmus Gátlási zóna átmérője mm (a korong 7 mm) Escherichia coli MB—60 Bacillus sp. MB—833 Proteus vulgaris MB—1012 Pseudomonas aeruginosa MB—-979 Serratia marcescens MB—-252 Staphylococcus aureus MB—108 Bacillus subtilis MB—965 Sarcina lutea MB—1101 Staphylococcus aureus MB—698 (sztreptotricinnel szemben rezisztens) Streptococcus íaecalis MB—753 Alcaligenes íaecalis MB—10 Brucella bronchiseptiea MB—965 Salmonella gallinarum MB—1287 Vibrio percolians MB—1272 Xanthomonas vesicatoria MB—815 4 mg/ml 25 7 42 7 15 17 29 20 29 12 13 7 35 34 7 Gátlási zóna átmérője mm Keresztrezisztencia spektrum ,,n„ « n r (Korong — l mm) 10 15 20 25 30 35 40 50 Vizsgálati mikroorganizmus* Escherichia coli MB—60 (érzékeny elődök) Sztreptomicinnel szemben rezisztens törzs Sztreptotricinnel szemben rezisztens törzs Oxámicinnel szemben rezisztens törzs Pleocidinnel szemben rezisztens törzs Klóramfenikallal szemben rezisztens törzs Klórtetraciklinnel szemben rezisztens tijrzs Oxitetraciklinnel szemben rezisztens törzs Neomicinnel szemben rezisztens törzs Tetracikliinnel szemben rezisztens törzs Viomieinnel szemben rezisztens törzs Polimixinnel szemben (rezisztens törzs Grizeinnel szemben rezisztens törzs 4 mg/ml 25 23 18 18 39 12 17 7 45 33 17 15 24 * A vizsgalatokat egy sorozat, antibiotikumokkal szemben rezisztens E. coli törzzsel szemben végeztük, amelyeket az őstörzsnek (MB—60) az antibiotikum gátló koncentrációival történt kezelése után különítettünk el. A baktériumokkal szembeni spektrumban és keresztrezisztencia vizsgálatokiban mutatkozó különbségek tanulmányozásán felül, amit a fentiekben mutattunk be, tanulmányoztuk kü. lönböző anyagok az E. coli ellenőrző lemeze közegéhez való adagolásának hatását, ami — amint ez a gátlási övezetek méreteinek változásából kitűnik — különbözőképpen befolyásolja az egyes antibiotikumok aktivitását. E vizsgálatok eredményét az alábbi táblázatban közöljük: Különleges hatások spektruma 55 60 Escherichia coli MB—60 Escherichia coli P5 MB—60 Gátlási zóna átVizsgálati mikromérője organizmus Adalék mm (korong 7 mm) adalékméntes kontroll Dowex-oldható ET 91 műgyanta 25 24 26