158336. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-) (cisz-1,2-epoxipropil)-foszfonsav előállítására mikrobiológiai úton
43 158336 44 kat megfagyasztjuk, majd vizet aszeptikus körülmények között liofilezéssel eltávolítjuk. A steril szárazanyagot tartalmazó ampullákat aszeptikusán leforrasztjuk. Parenterális alkalmazáskor egy-egy ampulla tartalmáihoz 5 ml, injekcióhoz való steril vizet adunk. Perorális folyadék, alak 5 ml Dinátrium (—) (cisz-1,2--epoxipropil)-foszfonát (vízmentes) (5 ml-enkint 500 mg szabad savval egyenértékű) 660 mg Szacharóz — Glükóz — Citromsav — Nátriumbenzoát — Tömény narancsolaj — Tisztított víz, U. S. P. — 1000 ml adag 132,0 g 600,0 g 2.50,0 g 13,0 g 1,0 g 0,2 ml ad 1000 ml A szacharózt és a glükózt kb. 400 ml vízben feloldjuk, az oldódást melegítéssel elősegítve. Az oldat lehűlése után hozzáadjuk a citromsavat, nátriumbenzoátot, majd a tömény naranesolajat, és a folyadék térfogatát vízzel kb. 900 mire hígítjuk. Hozzáadjuk, ill. feloldjuk benne a (vízmentes) dinátrium (—) (cisz^l,2-epoxipropil)-foszfonátot. Az oldatot durvaszemcsés szűrőn való átszűréssel tisztítjuk. Előállítható a készítmény kétpal.ackos csomag alakjában is. Ilyenkor az egyik palack tartalmazza a vízmentes dinátrium (—) (cisz-1,2--epoxipropil)-foszfonátot, a másik pedig a megfelelő hígítószert. Ezekből a szükséghez képest a helyszínen készítendő el a perorálisan adagolandó folyadék. 1. palack Vízmentes dinátrium (—) (cisz-1,2-epoxipropil)-f oszf onát 2. palack Édesgyökérszörp, U. S. P. 100 ml Használatkor a 2. palack tartalmát az 1. palackba kell áttölteni és így feloldani az anyar got. Az oldat minden 5 ml-e 330 mg dinátrium (—) (ciszHl,!2^epoxipropil)-foszfonsavat (vízmentest) tartalmaz, ami 250 mg szabad savval egyenértékű. A (—) (c-isz-l,2-epoxipropil)Hfoszfonsav előnyösen alkalmazható baktériumölőszerként valamely sója alakjában. Jó eredményeket értek el felnőtt emberek baktériumos fertőzéseinek kezelésében és ellenőrzésében napi 0,25—4,0 g (—) (cisz-Ű,2-epoxipropil)^foszfonsavnák megfelelő só adagolásával, az adogok tényleges menynyisége az alkalmazott sótípustól függött. A nagyobb adagok alkalmazásakor a só típusát úgy 10 15 20 30 35 40 100 ml-enkint 6.60 g 45 50 55 60 es választották meg, hogy a kation még ilyen szinten se legyen túlságosan toxikus. Az optimális adag természetesen minden egyes esetben a kezelendő fertőzés típusától és súlyosságától függ, és a kis adagok elsősorban a gyermekgyógyászatban kerülnek alkalmazásra. Minden gyakorlati alkalmazás a gyakorló orvosok számára ismert módon történik. A találmány szerinti (—) (cisz-l,2-epoxipropil)-foszfonsav vegyületeket akár egymagukban, akár más biológiailag aktív alkotórészekkel és különösen más antibakteriális szerekkel, pl. eritromicinnel, linkomícinnel, penicilinnel, sztreptomicinnel, novobiocinnal, tilozinnal, gentamicinnel, kolisztinnel, kanamicinnel, oleandómicinnel, triacetiloleandomicinnel és spiromicinnel kombináltan lehet alkalmazni. 1. példa: A Streptomyces fradiae ATCC 21096 ferde agaros kultúréjéhoz 10 ml steril vizes 0,9%-os nátriumklorid-oldatot adtunk. A kultúra felületéről szedett kaparékkal sejtszuszpenziót készítettünk, és a szuszpenzióból egy 2 ml-nyi mintát terelőlapos 250 ml-es Erlenmeyer-lombikba adagoltunk, amelyben 50 ml alábbi összetételű steril FA tápoldat volt: g/liter élesztőkivonat 10 glükóz 10 MgS04 -7 H 2 0 0,05 foszfátpuff er* 2 ml víz a kívánt térfogatig * 91 g KH2 P0 4 .és 95,0 g Na 2 HP0 4 desztillált vízben egy literre oldva. A beoltott lombikot 28 C°-on 4 napon át inkubáltuk egy percenkint 220 fordulatszámú körbenforgó rázógépen 5 cm-es lökettel. A fenti módon készült vegetatív kultúrából 1,5 ml-es részleteket adagoltunk a négy 250 mles rekeszes Erlenmeyer lombik mindegyikébe, amelyekbe előzőleg egyenkint 50 ml steril FD tápoldatot adagoltunk. A tápoldatot úgy készítettük, hogy 20 g száraz zablisztett és 20 g paradicsompürét forró desztillált vízzel egy literre hígítottunk. A beoltott lombikokat 28 C°-on inkubáltuk egy, percenkint 220 fordulatszámú körrázógépen 5 cm-es lökettel. Az egyik lombikot egynapos, a másodikat kétnapos, a harmadikat háromnapos, a negyediket pedig négynapos inkubálás után vettük le. Ezután mindegyik lombik teljes tartalmáa hét percen át centrifugáltuk peroenkint 500 fordulatszámmal és a folyadékot dekantáltuk a szilárd részről. A felülúszó folyadékokat hatóanyagtartalomra megvizsgáltuk és az inkubálás után 4 nappal leszedett folyadékot aktívnak találtuk, amenynyiben ez a folyadék egy Proteus vulgaris dif-22
