158336. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-) (cisz-1,2-epoxipropil)-foszfonsav előállítására mikrobiológiai úton
39 158336 40 használhatók megfelelő adagolási egységű gyógyszerkészítmények előállítására. Valamenynyi sója hasznos közbenső termék a szabad savnak és más sóinak előállítása szempontjából. Az optikailag aktív bázisok, pl. aminők sói felhasználhatók a foszfonsavak optikailag aktív enantiomerjeinék elválasztására. Vizes oldataiban a (—) (cisz-1,2-epoxipropil)-foszfonsav rendkívül stabilis ammóniának vagy szerves aminokriak lúgos oldataival szemben egészen l-l pH értékig. Ha vizes oldatait 15 percen át 100 C°-on tartjuk 8—9 pH értéken, az antibiotikum nem inaktiválódik, kb. 3-nál kisebb pH értéken azonban instabilis, pl. 1,5 pH értéken szobahőmérsékleten felezési ideje kevesebb, mint 24 óra. Még ennél nagyobb pH értéken is instábilisnak találtuk, ha érintkezésben van szulfonsavas vagy foszfonsavas ioncserélő műgyantákkal. Ha ilyen típusú műgyantákkal 3 pH értéken csak aránylag rövid ideig érintkezik, visszanyerése már nem teljes. A vegyület rendkívüli mértékben poláris. Papírcsíkkal végzett vizsgálataink alapján az anyag a glukonsavhoz hasonló. Poláris oldószerek, mint pl. fenol még szerves aminők jelenlétében sem egykönnyen extrahálják. Hidrogén alakú kationcserélő műgyantákon végzett kromatográfiá vizsgálatok is poláris jellegére utaltak. Ilyen műgyantákon pl. az antibiotikum kisebb mértékben kötődik meg, mint a citromsav. Az új antibiotikum poláris természetére utal az is, hogy vizes oldatokban 5 pH értéken szinte egyáltalán nem adszorbeálódik aktívszénen. Savas anyagok nem adszorbeálják az antibiotikumot, a timföld azonban, akár bázisos, akár savval mosott, jó adszorbense az antibotikumnak. Vizes oldatból a vegyület erősen adszorbeálódik 5 pH értéken, de eluálható 9 pH-n. 9 pH értéken viszont erősen adszorbeálódik 75 %-os metanol-víz elegyből, de aránylag gyengén 25%-os metanol-víz elegyből. Ha vizes oldataihoz bárium- vagy kalciumsókat adunk, az antibiotikum nem csapódik ki. Az antibiotikum ammóniumsója abszolút metanolban csak korlátozottan oldódik, nátriumsója azonban 99%os metanol-víz elegyben oldható. Az itt leírt eljárás szerint előállított, antibiotikumtartalmú fermentációs levek aktivitása ml-enkint kb. 1 és 20 egység között váltakozik, a Proteus vulgaris használatán alapuló, a leírás szerinti standard hatóanyagtartalom-vizsgálat alapján. Az antibiotikum többféle módon tisztítható és nyerhető ki tisztább alakban. Az egyik ilyen eljárás abból áll, hogy az antibiotikumot anioncserélő műgyantákkal, pl. sztirol-divinilbenzol polimer rácshoz kötött polialkilamincsoportokból vagy kvaterner ammóniumcserélőből álló műgyantákkal adszorbeáltatjuk. Az adszorbeált antibiotikum a műgyantás adszorbátumból könnyen eluálható különféle sók vizes vagy vizes^alkoholos oldataival, pl. ammóniumklorid, nátriumklorid, nátriumacetát stb .oldattal. Az így kapott eluátum szükség esetén más tisztítási eljárásokkal tovább tisztítható, így pl. tisztítható az eluátum oly módon, hogy olyan pórusnagyságú poliakrilamid gél 5 ágyon bocsátjuk át, amely lehetővé teszi a 200 és 2000 közötti molekulasúlyú anyagok frákcionálását. Tisztítható az antibiotikum olyan módon is, hogy a szennyezett antibiotikum oldatot sztiroldivinilbenzol polimer rácsban az aromás 10 maghoz kötött nukleáris szulfonsavas cserélőcsoportokból álló, erősen savas kationcseréiő műgyantán bocsátjuk át, és a gyantát vízzel fejlesszük ki. Timföldön való adszorbeáltatással ugyancsak 15 tisztítható az antibiotikum: erre a tisztításra akár a bázisos, akár a savval mosott timföld alkalmas. Az adszorbeált antibiotikum a timföldről legkönnyebben kb. 11,2 pH értékű vizes vagy vizes-alkoholos ammóniumhidroxid olda-20 tokkal eluálható, az eluátumok frakciónként öszszegyűjthetők. A (—) (cisz-1,2-epoxipropil)-fosz>fonsav ammóniumsóját tartalmazó szennyezett szilárd frakciókat olyan módon is tisztíthatjuk, hogy az anyagot metanolban oldjuk, azonos tér-2g fogatú n-butanolt adunk az oldathoz, a metanolt elpárologtatjuk, a butanolban oldhatatlan anyagot szűréssel elválasztjuk, és a nagyobb tisztaságú antibiotikum-ammóniumsót tartalmazó butanolos oldatot visszanyerjük. A buta-30 nolos oldatnak csökkentett nyomáson való szárazra párlása útján szilárd alakban kapjuk meg az ammóniumsót. Vízzel is extrahálhatjük a butanolos oldatból az ammóniumsót, ily módon a (.—) (cisz-1,2-epoxipropil)-foszfo:nsav ammóni„5 umsójának vizes oldatához jutunk. Az antibiotikum kalciumsóját úgy kapjuk meg, hogy az ammóniumsó vizes oldatához kalciumhidroxidot adunk és a kapott oldatot csökkentett nyomáson melegítjük. Egy másik módja a kalci-41l umsó előállításának az, hogy az antibiotikum valamely másik sójának oldatát kalcium alakú kationcserélő műgyantán bocsátjuk át. Ha a 10 mg/ml koncentrációjú vizes oldatot állni hagyjuk vagy rázatjuk, a kalciumsó kikristá-5 lyosodik. A (—) (cisz-1,2-epoxipropil)-foszfonsav és sói hasznos mikrobaellenes szerek, amelyek aktív módon gátolják mind a gram-pozitív, mind pedig a gram-negatív patogén baktériumok növekedését. Ez az antibiotikum, és különösen sói aktivak a Bacillus, Escherichia, Staphilococcus, Salmonella és Proteus típusú patogén mikroorganizmusokkal és antibiotikumokkal szemben rezisztens törzsekkel szemben. Ilyen patogén mikroorganizmusokra jellemző példák a Bacillus subtilisj Escherichia coli, Salmonella sehottmuelleri, Salmonella gallinarum, Salmonella pullorum, Proteus vulgaFis, Proteus mirabilis, Proteus morganii, Staphylococcus eureus és Staphylococcus pyogenes. A (—) (cisz-1,2-epoxipropil)^foszfonsav és sói tehát felhasználhatók mint antiszeptikus szerek arra, hogy gyógyszerészeti, fogászati és orvosi műszerekről és "más, 65 az említett mikroorganizmusok által történő 20
