158336. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (-) (cisz-1,2-epoxipropil)-foszfonsav előállítására mikrobiológiai úton

158336 35 36 tenyésztésére és az antibiotikum termelésere megfelelő táptalaj pH értéke1

5,5 éis 7,5 között váltakozhat. Bár a találmány szerinti új antibiotikum 5 akár felszíni, akár mélykultúrában előállítható, ezidőszerint elonyösebbnek látszik a méiykultúráfoan történő termelés. Kis méretben a fermentáció kényelmesen elvégezhető olyan módon, hogy a táptalaj megfelelő mennyiségét 10 palackokba helyezzük, a paladkokat és tartalmukat 120 C°-ira való hevítéssel sterilezzük, majd a palackokat a Streptornyces faj egyik (—) (eisz-1,2-epoxipropil)-foszri:onsavafc termelő törzsének spóráival vagy vegetatív sejtfcultúrá-15 jávai beoltjuk, a palackok nyakát gyapottal lazán bedugaszoljuk, és a fermentációt állandó hőmérsékletű teremiben kb. 28 C°-on, rázóberendezésben 3—5 napon át engedjük végbemenni. Nagyobb méretben dolgozva célszerű a 20 fermentációt keverőkkel ellátott, megfelelő tartályokban, a fermentációs táptalaj levegőztetése mellett végezni. Ennél a módszernél a táptalajt magálban a tartályban állítjuk elő és 120 C°-ra. valló hevítéssel sterilezzük. Lehűlés után 25 a sterilezett tJáptalajt a Streptornyces vegetatív sejtkultúrájának megfelelő forrásával beoltjuk és 2—4 napig hagyjuk fermentálni, miközben a táptalajt beverjük és/vagy levegőztetjük, és a hőmérsékletet kb. 28 C°-on tartjuk. A (—) 30 (cisz-1,2-epo«ipropil)-foszfonsav termelésének e módja különösen alkalmas az új antibiotikum nagyobb mennyiségének előállítására. Ha mélyknlltúrában történik az antibiotikum előállítása, megfelelő habzásgátló anyagot, mint 35 pl. szójababolajat, ricinusolajat, 1% oktadekanol ásványolajos oldatát vagy (polimerizált propilénglikoít, pl. Polyglycol 2000-t adhatunk csekély mennyiségiben a fermentációs léhez, hogy a fermentáció során elkerüljük a túlságosan 40 erős habiképződést. A 833A antibiotikumot termelő mikroorganizmusok fenti leírásait olyan megfelelő mikroorganizmus törzsek példájaként közölijük, amelyek az antibiotikum előállítására felhasználhatók, de megjegyzendő, hogy a jelen találmány nincs korlátozva a fenti részletes leírásoknak megfelelő organizmusokra. A jelen találmány más mikroorganizmusok alkalmazásaival is számol, beleértve vagy a természetes anyagokból elkülönített Streptornyces törzseket vagy az azokból mutáció útján kapottakat, mint pl. a természetes kiválasztást vagy mutációt előidéző szerek, pl. röntgenbesugárzás, ibolyántúli besugárzás, nitrogénmustáirok és effélék alkalmazása útján kapott törzseket. A találmány szerinti új antibiotikumot megfelelő vizes tápoldatolknák ellenőrzött viszonyok között történő aerób fermentációja útján, a továbbiakban (—) (cisz-1,2-epoxiprqpil)-foszfonsavat termelő mikroorganizmus törzsekként leírt mikroorganizmusok segítségével előállítani. Az új antibiotikum előállításária alkalmasak a vizes táptalajok, pl. azok, amelyeket más antibiotikumok előállítására használnák. E táptalajok szén- és a milkroorganizmusok által felvehető nitrogénforrásokat, valamint szervetlen sókat tartalmaznak. A fermentációs táptalajok tartalmaznák ezenfelül a 'mikroorganizmusok növekedéséhez szükséges olyan fémnyomokat is, amelyek 'egyébként a táptalaj egyéb alkotórészeiben- mint szennyezések vannak jelen. Általában szénhidrátokat, mint pl. cukrokat, szacharózt, maltózt, fruktózt, láktózit stb. és keményítőket, pl. magvakat, .zabot, rozsot, kukoricaibeményítőt, kükorieapogácsát stb. lehet használni akár egymagukban, akár egymással kombináltan, mint szénforrásokat a táptalajhoz. A táptalajban felhasznált szén hidra tforrás vagy -források pontos mennyisége részben a táptalaj más alkotórészeitől függ, de rendszerint elegendő, ha a táptalaj súlyára vonatkoztatva 1 és 6% közötti szénhidmtmennyiséget alkalmazunk. E szénforrásokat egyedenkint lehet alkalmazni, vagy a táptalajban több ilyen szénforrás alkalimazható. Rendkívül sokféle fehórjeszerű anyag, pl. különböző kazeinlhidro'lizátum'ok, szójaliszt, kukoriealeikvár lepárlási maradékok, élesztőhidrolizátumiok, paradicsompüré stb. alkalmazható, mint megfelelő nitrogénforirás. A különböző niitrogéniforrások akár egymagukban, akár keverékek alakjaiban a vizes táptalajra vonatkoztatva 0,2—fi súly% mennyiségben alkalmazhatók. A (—) (cisz-1,2-epoxiprapil)-foszfonsaiV előállítására alkalmas táptalajokra a következőkben adunk példákat. . A (—) (cisz-1,2-epoxipropil)Hfoszfonsavat termelő mikroorganizimusoík segítségével történő fermentációt 25 és 38 C° közötti -hőmérsékleten .hajthatjuk végre. Optimális eredmények 'elérése céljából legjobb a fermentálást 26 és 30 C" közötti hőmérsékleten végezni. A Streptornyces Aktív anyag meghatározása A (—) (cisz^l,2-epoxipropil)-foszfonsav kényelmesen meghatározható a koronglemezes módszerrel, kísérleti organizmusként a Proteus vulgaris MB—838 (ATC'C 21100 és NRRL, B— 3361) törzsét használva.'A kísérleti kultúrát 0,2 % élesztőfcivioniatoí (Difco) tartalmazó tápagar (Difco) ferde tenyészetén tartjuk fenn. A' beoltott ferde tenyészeteket 37 C°-on infcubáljuk 18—24 óra hosszat, majd egy hétig hűtőszekrényben tartjuk őket, minden héten friss ferde tenyészetek eit készítve. A vizsgálati lemezek számára az oltóanyagot minden nap frissen készítjük olyan módon, hogy egy 250 ml-es Erlenmeyer lombikban levő, 0,2% élesztőkivonatot (Difco) tartalmazó 50 ml tápoMatot (Difco) a ferdetenyészet kaparékával beoltunk. A palackot 37 C°-on hagyjuk ink'ubálni 18—24 óra hosszát rázógépben, majd a leveskultúrát 40% fényáteresztőképességre állítjuk be 660 m/x hullámhosszon, egy 10 15 20 25 S0 35 40 45 50 55 60 18